| 研究概要 |
フリッパーゼは脂質の膜を横切る移動(フリップ-フロップ)を触媒するタンパク質である.フリッパーゼの実体についてわからない点が多い.細胞はいくつかのフリッパーゼを持っていると考えられるが,このうち最も詳しく調べられているのは動物細胞形質膜のフリッパーゼである.このタンパク質はホスファチジルセリンに特異性が高く,ATP依存的に脂質の外層から内層への移動を触媒する.形質膜フリッパーゼの生体内での機能はわかっていないが,膜脂質の非対称分布の維持やエンドサイトーシスに重要な役割を果していると考えられている.
我々は以前に細胞外のホスファチジルセリンは主としてフリップ-フロップによって細胞内へと取り込まれることを示唆する結果を得ている.(Kobayashi,T.and Arakawa,Y(1991)J.Cell.Biol.113,235-244).ホスファチジルセリンの細胞への取り込みを調べている過程で我々は不飽和脂肪酸を有するホスファチジルセリンには細胞毒性があることに気付いた.ホスファチジルセリン耐性の変異株では取り込みの最初の段階であるフリップ-フロップの活性が低下していると考え,突然変異を誘発したCHO細胞からホスファチジルセリン耐性株を取得した.得られた変異株について形質膜フリッパーゼの活性を測定したところ,ほぼ40%の株がホスファチジルセリンのフリップ-フロップ活性を欠損していた.このような変異株を用いて1)脂質の非対称性の測定,および2)(エンドサイトーシス活性,を測定した.その結果,脂質の非対称性は変異株と親株で変化がないことがわかった.一方ルシファーイエロ-および西洋ワサビパーオキシダーゼ(HRP)の取り込みで見た変異株のエンドサイトーシス活性は親株の半分程度に減少していた.このことはエンドサイトーシスにリン脂質のフリップ-フロップが関与していることを示唆している.
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