染色体凝縮に関する遺伝子(RCC1)の機能の解明

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05680615
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 関口 猛 九州大学, 大学院医学系研究科, 助手 (60187846)
• キーワード: RCC1 / phosphorylation / cdc2 Kinase / alternative splicing

研究概要

非同調下及びM期同調下のHeLa細胞の全蛋白質を非平衡二次元電気泳動で展開し、RCC1蛋白質をイムノブロットで検出して比較した。RCC1蛋白質は6個のスポットとして検出されたが、M期では塩基性側の2個のスポットが弱くなり、残り4つのスポットのうち酸性側のスポットが強くなっていた。N端の8-29番目のアミノ酸を欠いたものでは非同調下では主に1個のスポットとして検出されたが、M期では酸性側にもう1個のスポットが生じた。酸性側のスポットはアルカリホスアターゼで処理すると消失した。これらの結果は、RCC1蛋白質がM期特異的にリン酸化されている可能性を強く示唆する。
N端の11番目のSerは、M期に活性化するcdc2 kinaseのリン酸化部位となりうる。そこで、SerをAlaに置換したものではスポットの数が減少していた。この結果から11番目のSerがM期特異的な修飾部位の1つであると予測される。
また、N端領域において、93bpのinsertionをもつcDNAが新たに見つかった。ヒトのゲノム中にinsertionと同一の配列がみつかり、alternative splicingが行なわれていることが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Nakashima,T.Sekiguchi,T.Kuraoku,A.Fukushima,K.Shibata,Y.Komiyama,S.Nishimoto,K.: "Molewlan cloning of a human complemertary DNA encoding a uoel protein,DAD1, Whose defect couses apoptotic cell death in hauste BHK21 cells." Mol.cell.Biol.13. 6367-6374 (1993)
• [文献書誌] Noguchi,E.Sekiguchi,T.Yamashita,T.Nichimoto,T.: "Molecular cloning and identification of two types of hausts cyclin-dependent Kinases:cdk2 and cdk2L" Biochem. Biophys. Res. Comm.197. 1524-1529 (1993)
• [文献書誌] Hayashida,T.Sekiguchi,T.Noguchi,E.Sunamoto,H.ohba,T.Nishimoto,T.: "The CCG1/TAFII250 gene is mutated in tsB/V 462 chls of BHK21: a temperature sensitive cell cycle mutant" Gene. (発表予定). (1994)
• [文献書誌] Nakashima,T.Sekiguchi,T.Sunamoto,H.Yura,K.Tomoda,S.GO.M.kere.J.Schlessnid.D Nishimoto,T.: "Stracture of the CCG1 genc,arelationship between the exon/intron and the foctieral domain / module of CCG1 protein" Gene. (発表予定). (1994)