1993 年度実績報告書

ショウジョウバエを用いたDNA修復におけるポリADP-リボース合成酵素の機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	05770072
研究機関	筑波大学
研究代表者	内田和彦筑波大学, 基礎医学系, 講師 (90211078)
キーワード	DNA修復 / ポリ(ADP-リボシル)化 / ショウジョウバエ / アフリカツメガエル
研究概要	ショウジョウウバエを用いたDNA修復におけるポリ(ADP-リボース)合成酵素の機能解析ポリ(ADP-リボシル)化は、核内のタンパク質にポリ(ADP-リボース)残基を付加する反応で、阻害剤を用いた実験から、細胞の増殖や分化との関連が示唆されているが、未だにその生理的役割は不明である。そこで、タンパク質のADP-リボシル化の生理機能を解析する上で、有用と考えられるアフリカツメガエル、サクラマス、ショウジョウバエから単離した本酵素の_cDNAを用いて、卵割に伴う遺伝子レベルでの変化を解析した。また、ショウジョウバエでは、本酵素遺伝子の欠損した変異体を得ることを試みた。今年度の結果は次の通りである。 1)アフリカツメガエルの_cDNAをプローブとして発生のどの時期に発現されるかを検索し、本酵素の遺伝子発現は発生初期に高く、漸減することがわかった。また、mRNAのin situハイブリダイゼーション法によって、これらのmRNAの局在を調べた結果、表皮、脊索に高い発現が認められたが、その他、特に局在は認められなかった。 2)クローン化したショウジョウバエのポリADP-リボース合成酵素遺伝子をプローブとして唾腺多糸染色体上でのポリADP-リボース合成酵素遺伝子の位置を決定した。 3)既に単離されている突然変異の中から、ポリADP-リボース合成酵素遺伝子の座位と同じ位置にマップされる突然変異体、5つを同定した。いずれの変異体もホモ接合体で致死であった。サザンプロットハイブリダイゼーション法によりポリADP-リボース合成酵素遺伝子の欠失を解析している。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Uchida,K.: "Poly(ADP-ridose) Polymerase:Structural Conservation amongDifferent Classes of Animals and its Implications." Mo1.Cell.Bioochem.(in press).
[文献書誌] Ichikawa,Y.: "Mutation of k-ras protooncogene is associated with histologicalsubtypes in human mucinous ovarian tumors." Cancer Res.54. 33-35 (1994)
[文献書誌] Uchida,K.: "Cloning cDNA encoding Drosophila poly(ADP-ribose) polymerase;leucine zipper in the auto-modification domain.21GC03:Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A." 90. 3481-3485 (1993)
[文献書誌] Uchida,K.: "Preferential Degradation of Protein-bound (ADP-ribose)n by Nuclear Poly(ADP-ribose)Glycohydrolase from Human Placenta." J.Bio1.Chem.268. 3194-3200 (1993)
[文献書誌] Uchida,K.: "Isolation of poly(ADP-ribose) polymerase cDNA from Xenopuslaevis; Phylogenetic conservation of the functional domains." Gene. 137. 293-297 (1993)
[文献書誌] Ozawa、Y.: "Isolation of cDNAs encoding the catalytic domain of poly(ADP-ribose) polymerase from Xenopus laevis and cherry salmon usingheterologous oligonucleotide consensus sequences." Biocem.Biophys.Res.Commun.193. 119-125 (1993)
[文献書誌] Miwa,M.: "ADP-ribosylation reactions." G.G.Poirier and P.Moreau、Eds. Splinger-Verlag:New York., (1992)
[文献書誌] Miwa、M.: "The Post-translational Modification of Proteins:Roles in Molecular and Cellular Biology" S.Tuboi,N.Taniguchi,and N.Katunuma Eds.1992,Japan Scientitic Society Press:Tokyo., 281 (1992)

1993 年度 実績報告書

ショウジョウバエを用いたDNA修復におけるポリADP-リボース合成酵素の機能解析

研究代表者

内田 和彦 筑波大学, 基礎医学系, 講師 (90211078)

研究成果

[文献書誌] Uchida,K.: "Poly(ADP-ridose) Polymerase:Structural Conservation amongDifferent Classes of Animals and its Implications." Mo1.Cell.Bioochem.(in press).

[文献書誌] Ichikawa,Y.: "Mutation of k-ras protooncogene is associated with histologicalsubtypes in human mucinous ovarian tumors." Cancer Res.54. 33-35 (1994)

[文献書誌] Uchida,K.: "Cloning cDNA encoding Drosophila poly(ADP-ribose) polymerase;leucine zipper in the auto-modification domain.21GC03:Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A." 90. 3481-3485 (1993)

[文献書誌] Uchida,K.: "Preferential Degradation of Protein-bound (ADP-ribose)n by Nuclear Poly(ADP-ribose)Glycohydrolase from Human Placenta." J.Bio1.Chem.268. 3194-3200 (1993)

[文献書誌] Uchida,K.: "Isolation of poly(ADP-ribose) polymerase cDNA from Xenopuslaevis; Phylogenetic conservation of the functional domains." Gene. 137. 293-297 (1993)

[文献書誌] Ozawa、Y.: "Isolation of cDNAs encoding the catalytic domain of poly(ADP-ribose) polymerase from Xenopus laevis and cherry salmon usingheterologous oligonucleotide consensus sequences." Biocem.Biophys.Res.Commun.193. 119-125 (1993)

[文献書誌] Miwa,M.: "ADP-ribosylation reactions." G.G.Poirier and P.Moreau、Eds. Splinger-Verlag:New York., (1992)

[文献書誌] Miwa、M.: "The Post-translational Modification of Proteins:Roles in Molecular and Cellular Biology" S.Tuboi,N.Taniguchi,and N.Katunuma Eds.1992,Japan Scientitic Society Press:Tokyo., 281 (1992)

1993 年度実績報告書

内田和彦筑波大学, 基礎医学系, 講師 (90211078)