ヒトB細胞抗原受容体構造の研究

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05770230
• 研究機関: 鳥取大学
• 研究代表者: 乾 誠治 鳥取大学, 医学部, 助教授 (70243384)
• キーワード: B細胞 / 抗原受容体 / シグナル伝達

研究概要

昨年度までの研究でマウスB細胞に発現し、lgMレセプターと結合する52kDaの分子p52を認識するモノクローナル抗体19-14を作製した。本年度は19-14をプローブとしてlambdagt11cDNAライブラリーをスクリーニングして、p52をコードする候補cDNAを得た。得られた600bpのcDNAをシークエンスしたところ未知の分子であることがわかった。p52をコードする完全長のcDNAクローンを得るためにこの600bpのcDNAクローンをプローブとして、別のcDNAライブラリーをスクリーニングした。2×10^5クローンのサイズのライブラリーから17クローンのcDNAを選択してシークエンスしたところ、全て同じ配列を含むことがわかった。このうち最長のcDNAクローンは1.4kbpであった。このcDNAクローンがコードするタンパクの大きさ、性状を解析するためにグルタチオンSトランスフェラーゼとの融合タンパクを合成する発現ベクターにこのcDNAを組み込み、大腸菌で発現させた。合成された融合タンパクを精製してウエスタンブロットを行ったところ、p52を認識するモノクローナル抗体19-14はこの融合タンパクと特異的に反応した。従ってこのcDNAクローンは、p52をコードする可能性が高いことが示された。今後はこの融合タンパクをウサギに免疫して抗血清を得てこの血清が19-14と同じくp52を免疫沈降できるかを調べこのcDNAがp52をコードするかどうかを明らかにする。このcDNAクローンをプローブとしてヒトB細胞株mRNAのノザンブロット、ゲノムDNAのサザンブロットを行い、クロスハイブリダイゼーションの条件を決定し、ヒトB細胞株cDNAライブラリーをスクリーニングしてヒトp52cDNAのクローニングを試みる。

研究成果

• [文献書誌] Matsuo,T.: "C rosslinking of B cell receptor-relatedMB-1 molecule induces the protein tyrosine phosphorylation in early B lineage cells." J.Immunol.150. 3766-3775 (1993)
• [文献書誌] Sakaguchi,N.: "Immunoglobulin receptor (IgR)-associated molecules." Advances in Immunology. 54. 337-392 (1993)
• [文献書誌] Kuwahara,K.: "Induction of tyrosine phosphorylation in human B lineage cells by crosslinking MB-1 molecule of B cell receptor-related heterodimer complex." Biochem.Biophys.Res.Commun.197. 1563-1569 (1993)
• [文献書誌] Kuwahara,K.: "Identification of a52-kDa molecule (p52) co-precipitated with the immunoglobulin receptor-related MB-1 protein whichis inducibly phosphorylated by the stimulation with phorbol myristate acetate" J.Immunol.(印刷中).
• [文献書誌] Inui,S.: "Signal transduction through B cell specific molecule MB-1 in early lymphoid progenitor cells." Leucocyte Typing V White Cell Differentiation Antigens. (印刷中).