下垂体、視床下部におけるホルモンによる転写活性変化の細胞単位での検索

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05770777
• 研究機関: 独協医科大学
• 研究代表者: 鯉淵 典之 独協医科大学, 医学部, 助手 (80234681)
• キーワード: 視床下部 / 下垂体 / 遺伝子発現 / 免疫組織化学 / 初代培養 / in situ hybridization / 甲状腺ホルモン / テストステロン

研究概要

本研究の目的は、下垂体前葉細胞及び視床下部ニューロンの初代培養系及び動物個体を用いて、遺伝子発現調節に関与するホルモン作用(甲状腺ホルモンを中心として)の解析を細胞単位で行うことである。今年度、同テーマによる研究の結果、申請者は、下垂体前葉及び視床下部の無血清培地を用いた初代培養系を確立した。そして、視床下部の培養細胞では、視交叉上核より採取した細胞をにおいて、免疫組織化学的にvasopressin、VIP、somatostatinの発現を同定し、このうち、vasopressinが約24時間周期で拍動的に分泌している事を報告した。下垂体の培養細胞ではTSHbeta subunitの発現をin situ hybridizationによって同定し、この発現が甲状腺ホルモンによって直接調節されている事を報告した。現在、これらの培養系を用いて、リポソームを使い、細胞内への遺伝子の導入を試みている。動物個体を用いた実験では、室傍核小細胞区域において甲状腺を摘除する事によってc-erbAa2遺伝子の発現が上昇し、甲状腺ホルモンを補充する事によってこの上昇は抑えられる事を確認した。また、種々の組織において細胞の可塑性に関与するといわれているオルニチン脱炭酸酵素(ODC)遺伝子の発現がテストステロンの投与によって投与から約14時間後にマウス近位尿細管曲部において増加することを免疫組織化学、in situ hybridizationにより確認した。引き続き、甲状腺機能変化と共にODCが下垂体、視床下部においても変化するのではないかと考え、実験を行ったが発現量が低く、細胞を特定することができなかった。

研究成果

• [文献書誌] N.Koibuchi,S.Matsuzaki,H.-T.Ma,M.Sakaki and S.Yamaoka: "Induction of ornithine decarboxylase immunoreactivity in the male mouse kidney following testosterone treatment:An axial heterogeneity in the proximal tubule." J.Endocrinology. 136. 85-89 (1993)
• [文献書誌] K.Watanabe,N.Koibuchi,H.Ohtake and S.Yamaoka: "Circadian rhythms of vasopression release in primary cultures of rat suprachiasmatic nucleus." Brain Research. 624. 115-120 (1993)
• [文献書誌] 鯉淵典之,大竹英樹,山岡貞夫: "TRHによる下垂体初代培養細胞TSHbeta subunit遺伝子発現の変化" 神経化学. 32. 552-553 (1993)
• [文献書誌] N.Koibuchi,S.Matsuzaki,M.Saaki,H.Ohtake and S.Yamaoka: "Heterogeneous expression of ornithine decarboxylase gene in the mouse kidney following testosterone treatment." Histochemistry. 100. 325-330 (1993)
• [文献書誌] N.Koibuchi,R.B.Gibbs,K.E.Jones,S.Yamaoka,W.W.Chin,D.W.Pfaff and M.Suzaki: "Increase in c-erbAa2 mRNA in the parvocellular region of the paraventricular nucleus of the hypothalamus following thyoridectomy in the adult male rat." Neurosci.Lett.164. 159-162 (1993)