| 研究概要 |
ヒトTS遺伝子のプロモーターには現在までに知られているプロモータの共通配列、TATAボックスやGCボックスなどが存在せず,極めてユニークな調節を受けていると考えられる。本研究はこのようなユニークな特徴を持つヒトTS遺伝子のプロモーター領域の新規機能配列の解析を目標として行なわれた。
1.プロモーターの機能配列の決定
ヒトTS遺伝子プロモーター領域の、詳細な欠失変異体を用いたCATアッセイにより、転写開始点の上流に2つと転写開始点の下流に1つの、合計3つのプロモーター活性に必須の領域を同定した。この内、転写開始点の上流に存在する2つの機能部位は、それぞれ、ベータグロビン遺伝子のプロモーター領域に見出されているCAに富んだモチーフと、マウスTS遺伝子のSpl結合領域を含んでいた。さらにこれら2つの配列は独立に機能しうることもCATアッセイにより示された。一方、転写開始点の下流に同定された必須領域は、ヒトTS遺伝子に特有な3回のくり返し配列とそれに相補的な配列を含んでおり、少なくとも一組の順および逆向きの配列がプロモーターの機能発現に必要であることが明らかとなった。
2.プロモーターの機能配列に結合する因子の同定
得られた欠失変異をもつヒトTS遺伝子のプロモーター領域をプローブとしてゲルシフト分析を行い、複数の因子のこの領域への結合を確認した。今後、結合の特異性、結合部位の確認などの解析が必要である。
3.ヒトTS遺伝子の開始コドン近傍に結合する因子の解析
HL-60細胞への欠失変異体DNAの導入は行うことができなかったが、ヒトTS遺伝子の開始コドンに部位特異的変異を導入したDNA断片を作製し、実際にこれらの因子がATGの配列そのものを認識していることを確認した。
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