| 研究概要 |
本研究の最終目標は、酵素法によるインスリンの全合成であるが、本年度は最終段階に当たるフラグメント縮合に焦点をしぼった。酵素としては、特異性の厳密なStaphylococcus aureus V8プロテアーゼ(SAPと略)、トリブシン(Tと略)およびリジルエンドペプ チダーゼ(Lと略)を使用した。8種類のインスリンフラグメントは島津PSSM-8型ペプチド合成機を用いて調整した。フラグメント縮合は、高濃度有機溶媒存在下(ジメチルホルムアミド、40%)、アミン成分2mM,カルボキシル成分10mM、pH6-7、室温、1-3日、可溶系について反応を行った。縮合は、高速液体クロマトグラフイにより調べ、下記の反応はいずれも、アミン成分のピークの消失と新しいピークの出現を認めた。新しいピークは予想された縮合物であることをアミノ酸分析による確認した。
アミン成分 カルボキシル成分 酵素 縮合物
A(1-17) A(18-21) SAP A(1-21)
B(1-13) B(14-22) SAP B(1-22)
B(1-22) B(23-30) T B(1-30)
A(1-21) B(1-29) L B(1-29)-A(1-21)
*A鎖:Cys6-Cys11,S-S架橋;Cys7-Acm;Cys20-Acm
B鎖:Cys7-Acm,Cys19-Acm
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