1993 年度実績報告書

ステロイドホルモンレセプターのヌクレオソーム結合部位を構成する蛋白質の構造解析

研究課題

研究課題/領域番号	05807003
研究機関	大阪大学
研究代表者	岡本一起大阪大学, 医学部, 助手 (40177085)
キーワード	ヌクレオソーム / レセプター / 核結合促進因子 / グルココルチコイド / 分子生物学
研究概要	グルココルチコイドレセプター(GR)情報伝達パスウェー上で必須の因子と考えられるGR核結合促進因子(ASTP)の作用機構は、核内でGRと協調してヌクレオソーム構造を変化させている可能性が考えている。本研究は、このASTPの一次構造を解析する事により、ASTPとGR、主要なヌクレオソーム構成成分であるヒストン及び特異的DNA配列(ホルモンレスポンスエレメント:HRE)の相互作用におけるASTPの役割を解明しようとしている。ASTPを電気泳動的に単一にまで精製し、リジンエンドペプチダーゼ、V8プロテアーゼで限定分解し電気泳動で分離、PVDF膜に転写して得られた6つのペプチドのN末端のアミノ酸配列をそれぞれエドマン法にて決定した。さらに精製ASTPを用いて特異的な抗ASTP抗体の作製に成功した。次に、この抗ASTP抗体を用いて、ラット肝cDNAライブラリーからASTP蛋白発現ベクターのスクリーニングを行ない、3個のクローンを得た。これらのクローンをPCR法で増幅し、得られたインサートDNAの全塩基配列を蛍光ターミネーター・シークエンス法で決定した。その結果、ASTPの全cDNA配列を解析出来た。ASTPのcDNAの全配列は2989bpで、1572bpから成るOpen Reading Frameを含み、524個のアミノ酸から成る蛋白質をコードしていた。cDNA配列より予想されるアミノ酸配列は精製ASTPの限定分解により得られた6種類のアミノ酸配列を全て含んでいた。また、その配列にはSV40のT抗原やステロイドホルモン受容体に認められる核移行シグナルに類似した配列が認められた。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Okamoto.K.: "Molecular Cloning of Rat Liver Glucocorticoid-Receptor Translocation Promoter." Biochem.Biophys.Res.Commun.193. 848-854 (1993)
[文献書誌] Nakanishi.Y.: "Effects of Chronic Administration of the Peroxisome Proliferator,Clofibrate,on Cytosolic Acetyl-CoA Hydrolase in Rat Liver." Biochemical Pharmacology. 45. 1403-1412 (1993)
[文献書誌] Isohashi.F.: "ATP-Stimulated Translocation Promoter that Enhances the Nulcear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor:Biochemical Properties and Its Function." Receptor. 3. 113-124 (1993)
[文献書誌] Liu.G.: "Purification and Characterization of a Macromolecular-Translocation Inhibitor III of Activated Glucocorticoid-Receptor-Complex Binding to Nulcei from Rat Liver." Eur.J.Biochem.218. 679-687 (1993)
[文献書誌] Nakanishi.Y.: "Subcellular Distribution of ATP-Stimulated and ADP-Inhibited Acetyl Co-A Hydrolase in Livers from Control and Clofibrate-Treated Rats:Comparison of the Cytosolic and Peroxisomal Enzyme." J.Biochem.(in press). (1994)
[文献書誌] Okamoto.K.: "Immunochemical Characterization of the ATP-Stimulated Glucocorticoid Receptor Translocation Promoter from Various Organs of Rat." J.Biochem.(in press). (1994)
[文献書誌] 上田清隆: "グルココルチコイド受容体実験法" 生物薬科学実験講座(広川書店)(印刷中), (1994)

1993 年度 実績報告書

ステロイドホルモンレセプターのヌクレオソーム結合部位を構成する蛋白質の構造解析

研究代表者

岡本 一起 大阪大学, 医学部, 助手 (40177085)

研究成果

[文献書誌] Okamoto.K.: "Molecular Cloning of Rat Liver Glucocorticoid-Receptor Translocation Promoter." Biochem.Biophys.Res.Commun.193. 848-854 (1993)

[文献書誌] Nakanishi.Y.: "Effects of Chronic Administration of the Peroxisome Proliferator,Clofibrate,on Cytosolic Acetyl-CoA Hydrolase in Rat Liver." Biochemical Pharmacology. 45. 1403-1412 (1993)

[文献書誌] Isohashi.F.: "ATP-Stimulated Translocation Promoter that Enhances the Nulcear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor:Biochemical Properties and Its Function." Receptor. 3. 113-124 (1993)

[文献書誌] Liu.G.: "Purification and Characterization of a Macromolecular-Translocation Inhibitor III of Activated Glucocorticoid-Receptor-Complex Binding to Nulcei from Rat Liver." Eur.J.Biochem.218. 679-687 (1993)

[文献書誌] Nakanishi.Y.: "Subcellular Distribution of ATP-Stimulated and ADP-Inhibited Acetyl Co-A Hydrolase in Livers from Control and Clofibrate-Treated Rats:Comparison of the Cytosolic and Peroxisomal Enzyme." J.Biochem.(in press). (1994)

[文献書誌] Okamoto.K.: "Immunochemical Characterization of the ATP-Stimulated Glucocorticoid Receptor Translocation Promoter from Various Organs of Rat." J.Biochem.(in press). (1994)

[文献書誌] 上田清隆: "グルココルチコイド受容体実験法" 生物薬科学実験講座(広川書店)(印刷中), (1994)

1993 年度実績報告書

岡本一起大阪大学, 医学部, 助手 (40177085)