| 研究課題/領域番号 |
05807206
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
綿矢 有佑 岡山大学, 薬学部, 教授 (90127598)
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| 研究分担者 |
根岸 和雄 岡山大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (70116490)
早津 彦哉 岡山大学, 薬学部, 教授 (10012593)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| キーワード | 細胞死 / エンドヌクレアーゼ / DNA損傷 / DNA二本鎖切断 / アポトーシス / 5-フルオロデオキシウリジン / dNTPプール / 不均衡 |
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| 研究概要 |
哺乳動物内デオキシリボヌクレオシド三リン酸(dNTP)プールに不均衡を生じさせる事により、DNAの二本鎖を切断するendonucledseの誘導とDNAの断片化、及びそれに伴う細胞死が引き起こされることを観察した。この分子機構を解明するため、細胞死の直接の原因であると考えられるDNA二本鎖切断酵素を精製し、その性質を調べた。マウス乳癌由来FM3A細胞に5-fludrodeoxyvridine(FUdR)を作用させ細胞内dNTPプールの不均衡を誘導した。この細胞を集め超音波破砕した後、超遠心して上清を分画し、DNA二本鎖切断酵素を精製した。この酵素活性をDNAを含むSDS-PAGEにより検討した結果、分子量は約40KDaであった。この酵素は二価金属イオンを要求せず、酵素活性の至適pHは6〜6.5であった。この酵素はZ_n^<2+>によりいちぢるしく活性が阻害された。一方、FUdRを作用させることにより細胞の核内にDNA二本鎖切断酵素を誘導させたのち、その核を単離しbuffer中でインキュベーションすると、EDTA存在下でヌクレオソーム単位のDNA断片を生じた。この断片化はCa^<2+>及びMg^<2+>によって促進されず、むしろ抑制された。また、精製したDNA二本鎖切断酵素を単離核に作用させると、dNTPプール不均衡による細胞死の場合と同様な又クレオソニーム単位のDNA断片が検出された。このDNA断片の5^1末端はリン酸基であった。このDNA二本鎖切断酵素は、一般的にアポトーシスと言われる細胞死に関係する酵素であると思われる。
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