ヒト培養二倍体線維芽細胞における老化・不死化の分子機構

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05834014
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 高野 利也 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (60051364)
• 研究分担者: 斎藤 深美子 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (10158917)
• キーワード: 細胞老化 / 不死化 / Type I collagenase遺伝子 / 転写調節 / 転写抑制因子 / 転写活性化因子

研究概要

私たちは,SV40 T抗原遺伝子を導入したヒト二倍体線維芽細胞MRC‐5から複数の独立な不死化細胞クローンを得,これらの細胞クローンについて現在までに以下のような研究を行なった。
【.encircled1.】細胞不死化は,細胞老化のあと死滅するクライシスの時期に何らかの変異が生じて出現することを明らかにした(Mech.Ageing Dev.,69:149,1992)。
【.encircled2.】Type I Collagenase遺伝子(以下COL遺伝子と略)の発現が細胞老化の過程で劇的に上昇し,不死化細胞ではCOL遺伝子の発現がほぼ完全に消失することを報告した(Biochem.Biophys.Res.Commun.,189:148,1992)。
【.encircled3.】COL遺伝子の約1.7kb上流に2カ所のcis‐acting regulatory elementsを見い出し,これらのelementsに結合する3種類の新規な転写因子を同定した。不死化細胞では88kDaの転写抑制因子Orpheusが優位に結合して働き,転写活性化因子Plutoはほとんど結合せず,逆に,細胞老化期の細胞ではPlutoが優位に結合して働くことを明らかにした。(Mol.Cell.Biol.,in press,1994;1993年12月日本分子生物学会シンポジュウム「老化と細胞死」にて発表)。
【.encircled4.】Plutoの候補としてNFAT familyの新しい遺伝子をクローン化した(未発表)。
【.encircled5.】Plutoの結合部位のごく近傍に結合部位をもつOrpheusについては,厚井照美博士(La Jolla Cancer Institute)がMAR/SARに結合して核マトリックス構造を作り,転写抑制に働くと報告したSATB‐1と極めてよく似ている。Southwestern blot法によってcDNAをクローン化した(未発表)。
【.encircled6.】不死化細胞クローンでは第5番および第10番染色体が消失または欠失していることを報告した(斎藤深美子他,日本人類遺伝学会にて発表,1991および1992)。

研究成果

• [文献書誌] Imai S and Takano T: "Loss of collagenase gene expression in immortalized clones of SV40 T antigen‐transformed human diploid fibroblasts." Biochem.Biophys.Res.Commun.189. 148-153 (1992)
• [文献書誌] Segawa K,Takano T,et al.: "Abrogation of p53‐mediated transactivation by SV40 large T antigen." Oncogene. 8. 543-548 (1993)
• [文献書誌] Imai S,Saito F,Takano T,et al.: "Escape from in vitro aging in SV40 large T antigen‐transformed human diploid cells:A key event responsible for immortalization occurs during crisis." Mech.Aging Dev.69. 149-158 (1993)
• [文献書誌] Matsuo K,Takano T,et al.: "Expression of the rat calmodulin gene II in the central nervous system:a 294‐base promoter and 68‐base leader segment mediates neuron‐specific gene expression in transgenic mice." Mol.Brain Res.20. 9-20 (1993)
• [文献書誌] Segawa K,Takano T,et al.: "Cyclin E enhances P53‐mediated transactivation." FEBS Lett.329. 283-286 (1993)
• [文献書誌] Imai S,Takano T,et al.: "Immortalization‐susceptible elements and their binding factors mediate “rejuvenation"of regulation on type I collagenase gene in SV40 large T antigen‐transformed immortal human fibroblasts." Mol.Cell.Biol.(in press). (1994)