インドの口腔扁平上皮癌発症におけるp53とras遺伝子変異の役割

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06044072
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 土田 信夫 東京医科歯科大学, 歯学部, 教授 (60089951)
• 研究分担者: A.K Muniraja Madurai Kamaraji大学, 生物科学部, 特別研究員 ; G Shanmugam Madurai Kamaraji大学, 生物科学部, 教授 ; 石井 裕子 東京医科歯科大学, 歯学部, 教務職員 (00251546)
• キーワード: p53 / 癌抑制遺伝子 / 口腔癌 / 扁平上皮癌 / PCR / SSCP / ras / タバコ

研究概要

インド南部マドライ市立病院での癌患者の中から口腔内に発症した扁平上皮癌を採取し、DNAを抽出し、それを鋳型としてp53癌抑制遺伝子のエキソン5-8までのDNA断片をそれぞれのプライマーセットを用いてPCR増幅し、SSCP法(PCR-SSCP法)を用いて変異の有無を検討した。このためインド側から特別研究員であるA.K.Munirajanが来校しPCR-SSCP法を習得した。また研究代表者がShanmugam教授を訪問し、技術指導並びにPrasadga外科医等との研究打ち合せを行った。53例を解析した結果、10症例にの変異を認め、変異の頻度は19%と我々の本邦における変異頻度、17/27(63%)の1/3以下であった。変異が認められたエキソン(E)はE5に4症例、E6に1症例、E7に2症例、E8に4症例の変異を認め(1症例についてはエキソン5と8の2カ所に変異を認めた)、E5とE8に変異が多いという本邦の結果と一致した。変異の内容を決定したところコドン143、149、181、205、237、273、274のミスセンス変異とエキソン7のスプライヌアクセプターの点突然変異、およびコドン273-274間に生じた4塩基の欠失であった。変異原を推定する上で重要と思われる11例の塩基置換の内容をみると10例(91%)がトランジッションでCGのメチルCが関与する可能性が2例(18%)であった。さらにp53遺伝子変異以外に変異ras遺伝子、並びにパピローマウイルスゲノムがインドにおける口腔扁平上皮癌の発症に関わる可能性があるのでそれらのPCRによる検出の系を確立した。

研究成果

• [文献書誌] Tsutsumi-Ishii Y,Tadokoro K,Hanaoka F,and Tsuchida N: "Response of heat shock element whithin the human HSP70 promoter to mutated p53 genes" Cell Growth & Differ.6. 1-8 (1995)
• [文献書誌] Hirano Y,Tsutsumi-Ishii Y,and Tsuchida N: "Roles of the p53 mutation in cell line establishment and identification of the minimum trans-activation and transform suppression domains." Eur.J.Cancer B.Oral Oncology. (in press). (1995)
• [文献書誌] Hirano Y,Yamato K,and Tsuchida N: "A temperature sensitive mutant of the human p53,Vall38,arrests rat cell growth without induced expression of cip1/waf1/sdi1 after temperature shift-down" Oncogene. (in press). (1995)
• [文献書誌] Sugito K,Yamane M,Hattori H,Hayashi Y,Tohnai I,Ueda M,Tsuchida N,and Ohtsuka K: "Interaction between hsp70 and hsp40,eukaryotic homologues of DnaK and DnaJ,in human cells expressing mutant-type p53" FEBS Letters. 358. 161-164 (1995)
• [文献書誌] Munirajan A.K,Tsutsunmi-Ishii Y,Mohanprasad R.K.C,Hirano Y,Munakata N,Shanmugam G,and Tsuchida N: "p53 geen mutation in oral carcinomas from India" (投稿準備中).