| 研究分担者 |
梶 昭 ペンシルヴァニア大学, 医学部(米国), 教授
ABELES A. 国立癌研究所, 染色体研究部(米国), 主任研究員
AUSTIN S. 国立癌研究所, 染色体研究部(米国), 部長
田渕 晃 信州大学, 医学部, 助手 (50236725)
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| 研究概要 |
プラスミドRts1のDNA複製開始蛋白質RepA(構成アミノ酸数288)の機能的ドメインを解明することを目的として、ファージP1の複製開始蛋白質(構成アミノ酸数286)との間でキメラ蛋白質を作成した。得られたRepAXはN末端側がRts1由来、C末端側はP1由来で、RepAX12(257:30),RepAX13(206:81),RepAX14(176:111),RepAX15(145:142),RepAX16(129:158),RepAX17(114:173)の6種類であり、それらについて機能解析を行い次のことが明かになった。
1)Rts1 oriから複製を開始させるためには、RepAのN末端側206アミノ酸の領域が必要であったのに対し、Rts1 oriDNAに対するin vitro結合にはN末端側129アミノ酸部分があれば十分であった。また オートリプレッサー活性には、in vivo,in vitro両実験系でともにN末端側257アミノ酸領域が必要であった。
2)6種類のRepAXはどれもP1 oriには結合せず、また活性化能は示さなかったが、RepAX15はRts1のみならずP1の複製を強く阻害した点で極めて注目される。このことは、Rts1 RepA,P1 RepAともにC末端側は二量体形成あるいは宿主因子(DnaJ,DnaK蛋白など)との反応部位である可能性を強く示唆する。
今後の計画
1)RepAX15が極めて興味ある性質を示すことが判ったので、N末端側がP1 RepA由来、C末端側がRts1 RepA由来で、repAX15と同一の部位で組換ったハイブリッド蛋白を作成し、機能解析を行う。
2)RepAX15を精製し、DNA結合能、二量体形成能などを詳しく調べる。
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