転写調節因子CREB結合蛋白(CBP)のクローニングとその細胞内分子機構の解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06044106
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 萩原 正敏 名古屋大学, 医学部, 助教授 (10208423)
• 研究分担者: 藤澤 仁 旭川医科大学, 教授 (10027039) ; MONTMINY Ma ソーク研究所, 助教授 ; 西沢 祐治 オクラホマ大学, 医学部, 研究員 ; 臼倉 治郎 名古屋大学, 医学部, 助教授 (30143415) ; 若林 隆 名古屋大学, 医学部, 教授 (00079998)
• キーワード: CBP / CREB / phosphorylation

研究概要

CREB結合蛋白のうち、真にCREB転写活性を制御する可能性のあるものを選び出した。
(1)In vitro転写実験
Hela及びPC12細胞核抽出液からCREBをCREオリゴカラムで除去した後、recombinant CREB及び精製したCREB結合蛋白画分を再添加し、Co-activator活性の有無を確認した。
(2)GAL-CATアッセイ
Gal4は、mammalian細胞には本来存在しないが、Gal4のDNA結合部位とCREBの融合蛋白はcAMP依存性にGAL-CAT活性を上昇させる。そこで、この系にCREB結合蛋白の発現ベクターをトランスフェクトし、そのCo-activator活性を細胞内で再現した。
我々とM. Montminyグループとの共同研究によりクローニングされたCREB結合蛋白CBPの転写制御機構の一端が明らかとなり、そのCREBに対する結合形態のイメージングに成功した。
(1)CREBファミリー蛋白ATF1もSer63がリン酸化されるとCBPに結合する。
(2)CBP自体もリン酸化制御を受けている。
(3)CREB2量体の電顕によるイメージングの結果世界で初めて転写因子CREBにCBPが結合していることの電顕写真の撮影に成功した。

研究成果

• [文献書誌] Yasunami, M., et al.: "Molecular cloning and characterization of novel basic helix-loop-helix protein structurally related to Neruo/BHF." Biochem. Biophys. Res. Commun.(in press).
• [文献書誌] Harada, H., et al.: "Phosphorylation of CREB in rat retinal cells after focal retinal injury." Exp. Exe. Res.(in press).
• [文献書誌] Okada, H., et al.: "Suppression of CD44 expression decreases migration and invasion of human glioma cells." International Journal of Cancer. (in press).
• [文献書誌] Kano, T., et al.: "Cocaine-induced CREB phosphorylation and c-fos expression were suppressed in parkinsonism model mice." NeuroReport. 6. 2197-2200 (1995)
• [文献書誌] Ohki, K., et al.: "Nitric Oxide induces c-fos gone expression via cyclic AMP response element binding (CREB) phosphorylation in rat retinal pigment epithelium." Brain Research. 696. 140-144 (1995)
• [文献書誌] Yoshida, K., et al.: "Light-induced CREB phosphorylation and gene expression in rat retinal cells." J. Neurochem.65. 1499-1504 (1995)