| 研究課題/領域番号 |
06044125
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
永田 和宏 京都大学, 胸部疾患研究所, 教授 (50127114)
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| 研究分担者 |
WALSH David シドニー大学, 主任研究員
GREENSPAN Da ウィスコンシン大学, 准教授
KLAUS Kuhn マックス, プランク研究所, 教授
細川 暢子 京都大学, 胸部疾患研究所, 助手 (00263153)
中井 彰 京都大学, 胸部疾患研究所, 助手 (60252516)
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| キーワード | ストレス蛋白質 / HSP47 / プロコラーゲン / 分子シャペロン |
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| 研究概要 |
HSP47は、小胞体に局在し、コラーゲンに結合性をもった、コラーゲン特異的分子シャペロンである。HSP47は、結合性および機能において基質(コラーゲン)特異性をもつだけでなく、その発現自体も基質であるコラーゲンと厳密に相関する調節を受けている。
HSP47アンチセンスRNAを導入することによって、コラーゲン合成がどのような影響を受けるか、また、合成されたプロコラーゲンの3量体形成や分泌にどのような影響があるかを検討した。HSP47cDNAをサイトメガロウイルスのエンハンサー、βアクチンのプロモータの下流にアンチセンス方向につなぎ、細胞に導入して安定発現株を得た。この細胞では、HSP47の合成量、蓄積量、およびmRNA量がいずれも顕著に減少していた。興味深いことに、この細胞では、HSP47の減少のほかに、コラーゲンの合成そのものが低下していることがわかった。コラーゲン合成の低下は、蛋白質レベル、mRNAレベルでも観察され、転写レベルの制御であるものと思われた。
一方、このようにHSP47量の低下した細胞における、新たに作られたプロコラーゲンの分泌速度を、パルスラベル/チェイス法、免疫沈降法を用いて検討すると、プロコラーゲンの細胞外への分泌速度の低下が観察された。さらに、HSP47およびコラーゲンの減少株に、あらたにコラーゲンα1鎖cDNAを導入した。HSP47減少株では、導入されたコラーゲンα1鎖は、ほとんど不溶分画に回収された。これは、HSP47が、コラーゲンに特異的な分子シャペロンとして、コラーゲンの分泌に積極的な役割をはたしていることを示唆しており、分子シャペロンとしてのHSP47の機能が確認された。
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