血管作動性物質の臨床的意義に関する分子生物学的研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06044129
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 中尾 一和 京都大学, 医学部, 教授 (00172263)
• 研究分担者: YANAGISAWA M Howard Hughes Medical, Institute・Univ. of, Associate ; INAGAMI Tada Dep. of Biochemistry, Dep. of Michrobiology, Professor ; DZAU Victor Falk Carkiovascular, Research Center Stan, Professor ; 伊藤 裕 京都大学, 医学部, 助手 (40252457) ; 吉政 孝明 京都大学, 医学部, 助手 (00252429) ; 田中 一成 京都大学, 医学部, 講師 (80179738)
• キーワード: ナトリウム利尿ペプチド / アンジオテンシンII受容体 / エンドセリン / エンドセリン受容体 / 遺伝子 / トランスジェニックマウス / ジーンターゲッティング / 遺伝子導入

研究概要

1)BNP遺伝子過剰発現トランスジェニックマウスの開発:
肝臓で発現するヒトserum amyloid P componentのプロモーターを用いて、導入遺伝子を20〜50コピー有するトランスジェニックマウスを4系統得た。これらBNPトランスジェニックマウスの肝臓では、明らかなBNP遺伝子発現が認められ、心室の約10倍のBNPmRNA濃度が検出された。これらマウスの血中BNP濃度は対照マウスの10〜100倍と著しく上昇していた。また、平均血圧は106±1mmHgであり対照マウス(126±2mmHg)に比べ明らかに低い血圧を示した。BNPの慢性降圧効果が証明された。
2)マウス及びヒトのCNP遺伝子のクローニング:
CNP遺伝しは少なくとも3つのエクソンと2つのイントロンから構成されていた。5'隣接領域にはCRE様配列等のcis配列が認められ、それらはANP及びBNP遺伝子の5'隣接領域と異なるものであった。マウスでは、第1染色体に、ヒトでは第2染色体に存在した。
3)エンドセリン(ET)-3及びET-B受容体遺伝子欠損マウスの確立:
ジーンターゲッテイング法によりET-3及びET-B受容体遺伝子欠損マウスの作製に成功し、遺伝子欠損マウスはメラノサイト及び腸管神経節の形成不全を示し、ET-3及びET-B受容体の神経堤由来の細胞の分化における意義が明らかになった。
4)マウス2型アンジオテンシンII受容体(AT2)遺伝子のクローニング:
ラットAT2cDNAクローニングに引き続きマウスAT2遺伝子をクローニングした。

研究成果

• [文献書誌] N.Hama et al.: "Detection of C-type natriuretic peptide (CNP) in human circulation and marked increase of plasma CNP level in septic shock patients." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1177-1182 (1994)
• [文献書誌] N.Hama et al.: "A monoclonal entibody to C-type natriuretic peptide-Preparation and application to radioimmuroassay and nevtralization experiment." J.Endocrinol.141. 473-479 (1994)
• [文献書誌] Y.Ogawa et al.: "Mdecular cloning of the complementary DNA and gene that encode mouse brain natriuretic peptide and generation of transgenic mice that overexpress the brain natriuretic peptide gene." J.Clin.Invest.93. 1911-1921 (1994)
• [文献書誌] H.Itoh et al.: "Transforming growth factor-1 stimulates,and glucocarticoids and epidermal growth factor inhibit the brain natriuretic peptide secretion from cultured amnion cells." J.Clin.Endocrinol.Metab.79. 176-182 (1994)
• [文献書誌] N.Tamura et al.: "Molecular cloning of hamster brain and atrial natriuretic peptide cDNAs. -Cardiomyopathic hamsters are useful models for brain and atrial natriuretic peptides-." J.Clin Invest.94. 1059-1068 (1994)
• [文献書誌] O.Nakagawa et al.: "Molecular cloning of human prostacyclin receptor cDNA and its gene expression on cardiovascular system." Circulation. 90. 1643-1647 (1994)
• [文献書誌] G.Shirakami et al.: "Changes of endothelin concentration in cerebrospinal fluid and plasma of patients with aneurysmal subarachnoid hemorrhage." Acta Anesth.Scand. 38. 457-461 (1994)
• [文献書誌] G.Shirakami et al.: "A case of "stunned myocardium" after noncardiac surgery:Increased concentration of plasma brain natriuretic peptide." Anesth.Analg.79. 175-179 (1994)
• [文献書誌] H.Itoh et al.: "Expression of biologically active receptors for natriuretic peptides in the human uterus during pregnancy." Biochem.Biophys.Res.203. 602-607 (1994)
• [文献書誌] Y.Ogawa et al.: "Molecular cloning,and chromosomal assignment of the mouse C-type natriuretic peptide (CNP) gene --comparison with the human CNP gene-" Genomics. 24. 383-387 (1994)
• [文献書誌] I.Kishimoto et al.: "Natriuretic peptide clearance receptor is trnascriptionally down-regulated by β_2-adrenergic stimulation in vascular smooth muscle cells." J.Biol.Chem.269. 28300-28308 (1994)
• [文献書誌] Y.Hashimoto et al.: "Functional evidence for an apical ANP receptor in LLC-PKL_1 kidney epithelial cells." Euro.J.Phamacol.268. 443-445 (1994)
• [文献書誌] K.Nakao et al.: "Endo the lium-derived Factors and Vascular Functions" Elsevier Science B.V., 7 (1994)