脳内γ-アミノ酪酸(GABA)_B受容体の構造と機能に関する共同研究

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06044193
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 栗山 欣弥 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (20079734)
• 研究分担者: SARVEY John ユニホームドサービス大学, 医学部, 教授 ; BOWERY Norm バーミンガム大学, 医学部, 教授 ; 廣内 雅明 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (70181196) ; 木村 宏 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (40079736)
• キーワード: GABA_B受容体 / 精製 / G蛋白連関型受容体 / モノクロナル抗体 / Gri蛋白 / cDNA cloning

研究概要

昨年度、Gタンパク連関型受容体と思われる新規のcDNAクローンを得た。このcDNAをプローブとして、ラット胎児脳及び小脳からのcDNAライブラリーをスクリーニングし、数個の陽性クローンを検出した。これらの塩基配列を調べたところ、ヒトのヘパトサイトグロースホルモンのレセプター(HGH-R)ファミリーの一種であるSEP遺伝子と同様の配列を示すことから、そのラットにおける配列であると考えられた。この陽性クローンには、プローブそのものの配列は存在せず、約50%のホモロジーで3'側非翻訳領域とハイブリダイズしたものと考えられた。さらなるスクリーニングを試みたが、プローブそのものの配列を示すクローンは得られなかった。そこで、PCRによる検討を試みた。すなわち、rapid amplification of cDAN end (RACE)法を行なった。その結果、278bpの既知配列に加え、その外側の領域の配列も明らかになった。データベースでこの配列を検索したところ、複数のGタンパク連関型受容体としかホモロジーを示さなかった。しかしながら、既存の神経伝達物質受容体とはほとんどホモロジーを示さず、最も近いものはolfactory受容体で、DNAレベルで約58%、タンパクレベルで約38%であった。この配列には疎水性の高い領域で存在し、膜貫通領域と考えられた。このような比較的保存性の高いと考えられる場所をはじめ、受容体間を越えて認められるような特徴的な配列と同様なものが、今回得られた配列中にも幾つか認められた。さらに、RT-PCRによる解析で、GABA_B受容体が発現している大脳皮質や小脳を始め、海馬や脊髄においてもこのcDNA配列の発現が確認された。以上の結果より、本cDNA配列がGABA_B受容体の可能性を有する新規のGタンパク連関型受容体であることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Nakajima K.: "Immunohistochemical demonstration of GABA_B receptors in the rat gastrointestinal tract." Neurochemical Research. 21. 211-215 (1996)
• [文献書誌] Hirouchi M.: "Molecular biological approaches to the GABA_B receptor." Pharmacology Reviews and Communications. 8. 151 (1996)
• [文献書誌] Kimura H.: "Immunohistochemical demonstration of GABA_B receptors in the brain." Pharmacology Reviews and Communications. 8. 167 (1996)
• [文献書誌] Nishikawa M.: "Functional conpling of Gi subtype with GABA_B receptor/adenylyl cyclase system : Analysis using reconstituted system with purified GTP-binding protein from bovine cerebral cortex." Neurochemistry Internatinal. (in press).
• [文献書誌] Kuriyama K.: "Molecular pharmacology of cerebral GABA_B receptor." Pharmacology & Therapeutics. (in press).
• [文献書誌] 栗山欣弥: "作動薬と拮抗薬" CLINICAL NEUROSCIENCE. 14. 933-935 (1996)
• [文献書誌] 栗山欣弥: "GABA受容体" 蛋白質核酸酵素. 42. 302-307 (1997)
• [文献書誌] Hirouchi M.: "GABA : Receptors, Transporters and Metabolism" Birkhauser Veriag AG, 9 (1996)
• [文献書誌] Kuriyama K.: "The GABA receptors (second edition)" Humana Press, 11 (1997)