フィブリノゲンの構造と機能の分子機作-遺伝的変異分子の解析とその応用

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06044196
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 松田 道生 自治医科大学, 医学部, 教授 (50048980)
• 研究分担者: AROCHA Pinan ベネズエラ科学研究所, 主任研究員 ; WEISEL John ペンシルバニア大学, 医学部, 教授 ; 朝倉 伸司 自治医科大学, 医学部, 講師 (70245033) ; 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607) ; 諏合 輝子 自治医科大学, 医学部, 講師 (60183844)
• キーワード: フィブリノゲン / 遺伝性異常フィブリノゲン / フィリン・ゲル / フィブリン重合反応 / フィブリノゲンの電顕像 / フィブリンの電顕像 / 血栓症 / 創傷治癒不全

研究概要

1.海外からの構造解析の依頼:
前年度から継続して来たfibrinogen (Fbg) Marburg (ドイツ)についての作業をほヾ終了した.本異常分子はα鎖遺伝子上でのA→T変異の為に停止コドンTAAが早期に出現するため,α鎖C末150アミノ酸残基が欠失し,しかもこの異常短縮α鎖にalbumin (Alb)がジスルフィド結合しているものである.既存の方法では精製が困難であったが,自家製のCa^<++>依存性抗体によるaffinity chromatographyを応用することにより,one-stepでの精製に成功した.活性型XIII因子(XIIIa)によるMarburg fibrin (Fbn)の架橋を分析した所,α鎖結合Albが別の分子のγ鎖に架橋されること,形成された架橋Fbnは線溶酵素plasminによって全く溶解されないことが判明した.この成績は患者で出血のほか創傷治癒不全と血栓症が併存した事実の一端を示す貴重な情報と考えられる.また,血清AlbのFbnへの架橋結合は全くの新知見であり,上の成績をまとめて目下投稿準備中である.Fbgs Gerris (イスラエル)とGuarenas I (ベネズエラ)については解析を継続中である.また,新たに韓国から血栓症患者で見出された異常Fbgが送付されて来た.2月末先方から医師が来訪し,解析を開始した.
2.海外の共同研究者との共同作業:
Fbg Caracas II (共同研究者の一人Arocha-Pinango博士からの依頼)の生化学的解析は初年度にほヾ完了したので,一部を他の共同研究者Weisel博士に送り,電顕学的手法による解析を依頼した.正常Fbnが均一で連続するFbn線維束による網状構造を形成するのに対し,CaracasII Fbnは不整でしかも到る処で断裂し,処々に大きな洞状構造(pore又はcave)を持つことが判明した.

研究成果

• [文献書誌] Kazuki Niwa: "A γ Gly-268 to Glu substitution is responsible for impaired fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki I." Blood. 87(11). 4686-4694 (1996)
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A monoclonal antibody that recognized a neo-antigen exposed in the E domain of fibrin monomer complexed with fibrinogen or its derivatives. Its application to the measurement of soluble fibrin in plasma." Blood. 88(6). 2109-2117 (1996)
• [文献書誌] John L. Woodhead: "The ultrastructure of fibrinogen Caracas II molecules, fibers and clots." J. Biol. Chem.271(9). 4946-4953 (1996)
• [文献書誌] Michio Matsuda: "The structure-function relationship of hereditary dysfibrinogens." Int. J. Hematol.64. 167-179 (1996)
• [文献書誌] 周 紅: "フィブリンの重合とγ鎖架橋形成を阻害する抗フィブリノゲンモノクロナル抗体の性状" 日本血栓止血学会誌. 7(3). 244-250 (1996)
• [文献書誌] 松田道生: "フィブリノゲンの誘導体,とくに可溶性フィブリン(soluble fibrin)とDダイマー(D dimer)について:その生成と存在様式についての考察 その1.可溶性フィブリン" 日本血栓止血学会誌. 8. 24-32 (1997)
• [文献書誌] Seiji Madoiwa: "A battery of monoclonal antibodies that induce unique conformations to evolve cryptic but constitutive functions of plasminogen." J. Biochem.121. 278-287 (1997)
• [文献書誌] Shinji Asakura: "Fibroblats spread on immobilized fibrin monomer by mobilizing a β1-class integrin, together with a vitronectin receptors, αVβ3 on their surface." J. Biol. Chem.,. (in press). (1997)
• [文献書誌] Michio Matsuda: "Glycosylation defects in blood clotting. In : Glycoproteins and Disease. J. Montreuil et al. (Eds.)" Elsevier Science B. V., 439-444 (1996)