1995 年度実績報告書

アポトーシスの機構と機能

研究課題

研究課題/領域番号	06045054
研究機関	東京理科大学
研究代表者	田沼靖一東京理科大学, 薬学部, 教授 (10142449)
研究分担者	ZANETTA Jean ルイ, パスツール大学・神経科学研究所, 教授青木一正東京理科大学, 薬学部, 助手 (10184029)
キーワード	アポトーシス / DNA断片化 / エンドヌクレアーゼ / 神経細胞死 / 神経変性疾患 / 多発性硬化症
研究概要	アポトーシスの特徴であるDNAの断片化を司るエンドヌクレアーゼに焦点を絞り、その実態の同定とcDNAクローニングを行うことによって、その構造と機能を解明し、多発性硬化症などの神経変性疾患における神経細胞死のメカニズムを解析することを目標とした。アポトーシスを誘発させたラット胸腺細胞から、アポトーシスを司るエンドヌクレアーゼを完全精製し、その性状を詳細に解析した。その結果、新規な核型エンドヌクレアーゼであることが判明し、DNaseγと名付けた。本酵素は、分子量33kDaのCa^<2+>、Mg^<2+>ー依存性の中性エンドヌクレアーゼであった。本酵素は、また、神経細胞にも存在することが明らかとなった。このDNaseγの精製標品をリシルエンドペプチダーゼ、又はアルパルティックエンドペプチダーゼで処理し、得られたペプチドをHPLCにより分取し、気相アミノ酸シクエンサーによってそれらの部分アミノ酸配列を決定した。これらの部分アミノ酸配列を基にプローブを作成し、ラットcDNAライブラリーよりクローニングを行い、その全塩基配列を決定した。このcDNAの塩基配列より予想されるアミノ酸配列から、DNaseγのアミノ基(N)末端には、プリカーサーペプチドがあることがわかった。また、このプリカーサー領域にはロイシンジッパーが存在していた。一方、カルボキル基(C)末端には核移行シグナルがあり、内部には、DNaseIと類似した酵素活性中心があることか明らかになった。本研究において、アポトーシスエンドヌクレアーゼの実態とそのcDNAの全塩基配列が世界で初めて明らかにされた。これらの成果は、DNaseγの遺伝子発現及び活性制御の機構を解明する上で重要な手がかりとなるばかりでなく、アポトーシスの分子機構と様々な疾患の発症機序を解明するために大きな貢献となる。

研究成果

(9件)

すべてその他

すべて文献書誌 (9件)

[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "A Macrocircular ellagitannin,ocnothein B,supreses mouse mammary tumor gene expression via inhibition of poly (ADP-ribose)glycohydrolase." Biochem.Biophys.Res.Commun.210. 329-337 (1995)
[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Induction of autoantibodies in normal mice by injection of nucleobindin and natural occurrence of antibodies against nucleobindin in autoimmune MRL/lpr/mice." Immunol.Lett.45. 35-42 (1995)
[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Apoptosos:a cell ellimination mechanism." Sut.Bull.12. 36-43 (1995)
[文献書誌] Sei-ichi: "Induction of apoptosis by T2 toxin and other natural toxins in HL-60 human promyelotic leukemia cells." Natural Toxins. 3. 129-137 (1995)
[文献書誌] Sei-ichi: "DNA fragmentation in apoptosis." Tiss.Cult.Res.Commun.53. 1-9 (1995)
[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "An endonuclease responsible for apoptosis." Aopotosis:Prog.Mol.Subcell.Biol.32. 1-12 (1995)
[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス-細胞の生と死-" 東京大学出版会, 145 (1994)
[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス実験プロトコール" 秀潤社, 236 (1994)
[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス-機能と機構-" 日経サイエンス社, 213 (1995)

1995 年度 実績報告書

アポトーシスの機構と機能

研究代表者

田沼 靖一 東京理科大学, 薬学部, 教授 (10142449)

研究成果

[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "A Macrocircular ellagitannin,ocnothein B,supreses mouse mammary tumor gene expression via inhibition of poly (ADP-ribose)glycohydrolase." Biochem.Biophys.Res.Commun.210. 329-337 (1995)

[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Induction of autoantibodies in normal mice by injection of nucleobindin and natural occurrence of antibodies against nucleobindin in autoimmune MRL/lpr/mice." Immunol.Lett.45. 35-42 (1995)

[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Apoptosos:a cell ellimination mechanism." Sut.Bull.12. 36-43 (1995)

[文献書誌] Sei-ichi: "Induction of apoptosis by T2 toxin and other natural toxins in HL-60 human promyelotic leukemia cells." Natural Toxins. 3. 129-137 (1995)

[文献書誌] Sei-ichi: "DNA fragmentation in apoptosis." Tiss.Cult.Res.Commun.53. 1-9 (1995)

[文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "An endonuclease responsible for apoptosis." Aopotosis:Prog.Mol.Subcell.Biol.32. 1-12 (1995)

[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス-細胞の生と死-" 東京大学出版会, 145 (1994)

[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス実験プロトコール" 秀潤社, 236 (1994)

[文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシス-機能と機構-" 日経サイエンス社, 213 (1995)

1995 年度実績報告書

田沼靖一東京理科大学, 薬学部, 教授 (10142449)