1994 年度実績報告書

細胞複製を制御する細胞内シグナルと遺伝子発現

研究課題

研究課題/領域番号	06247212
研究機関	奈良先端科学技術大学院大学
研究代表者	貝淵弘三奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00169377)
研究分担者	中福雅人奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (80202216)
キーワード	細胞内シグナル / G蛋白質
研究概要	細胞複製制御におけるRasおよびその類似G蛋白質の作用機構の解析を行い以下の結果を得た。 (1)RasによるMAPキナーゼの活性化機構私共はツメガエル卵の細胞質画分からRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼを活性化するのに必要な蛋白質因子(REKS)を部分精製している。昨年度は、REKSがRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼをリン酸化して活性化するプロテインキナーゼであることを明らかにした。また、RasがREKSと複合体を形成することから、REKSはRasの直接のターゲットであると考えている。最近、Rasがc-Raf-1と結合することが報告されているが、REKSがc-Rsf-1でないことを確認している。本年度は、ツメガエル卵の細胞質画分からREKSを高度に精製した。また、REKSが牛大脳細胞質画分にも存在することを明らかにし、これを均一蛋白質にまで精製した。ツメガエル卵と牛大脳から精製されたREKSは、ともに分子量約10万のプロテインキナーゼであり、自己リン酸化能を示した。一方、Cキナーゼやホスホリパーゼの制御因子として知られる14-3-3がRasと共同してREKSを活性化することも明らかにした。 (2)R-Rasの標的蛋白質の同定 GTP結合型のR-Rasをマトリックスに固定化してアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い、R-Rasの標的蛋白質の同定を試みた。その結果、牛大脳からGTP-R-Rasに結合する分子量約10万の蛋白質(p100)を分離精製できた。この蛋白質はGDP結合型のR-Rasには結合せず、標的蛋白質結合領域に変異を導入したGTP結合型のR-Rasにも結合しなかった。また、GTP結合型のH-RasとRhoには結合しなかった。したがって、この蛋白質はR-Rasの標的蛋白質のひとつであると考えられる。この蛋白質の部分アミノ酸配列からcDNAをクローニングしたところ、Ras GAPとホモロジーがあることが判明した。以上本年度の研究計画はほぼ達成することができたと考えている。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Miki,H.,et al.: "Association of Ash/Grb-2 with dynamin through the Src homology 3 domain." J.Biol.Chem.269. 5489-5492 (1994)
[文献書誌] Nakanishi,H.,et al.: "Different function of smg GDP dissociation stimulator and mammalian counterpart of yeast Cdc25." J.Biol.Chem.269. 15085-15091 (1994)
[文献書誌] Shimizu,K.,et al.: "Synergistic Activation by Ras and 14-3-3 Protein of a MAP Kinase Kinase Kinase Named Ras-dependent ERK Kinase Stimulator(REKS)." J.Biol.Chem.269. 22917-22920 (1994)
[文献書誌] Hirai,S.,et al.: "Ras-dependent signal transduction is indispensable but not sufficient for the activation op AP1/Jun by PKCδ." ENBOJ.13. 2331-2340 (1994)
[文献書誌] Wada,K.,et al.: "Localization of Rabphilin-3A,a putative target for Rab3A,at the sites of Ca^<2+>-dependent exocytosis in PC12 cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 158-165 (1994)
[文献書誌] Nakanishi,H.,et al.: "Kinetic properties of Ash/Grb2-interacting GDP/GTP exchange protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1225-1261 (1994)

1994 年度 実績報告書

細胞複製を制御する細胞内シグナルと遺伝子発現

研究代表者

貝淵 弘三 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00169377)

研究成果

[文献書誌] Miki,H.,et al.: "Association of Ash/Grb-2 with dynamin through the Src homology 3 domain." J.Biol.Chem.269. 5489-5492 (1994)

[文献書誌] Nakanishi,H.,et al.: "Different function of smg GDP dissociation stimulator and mammalian counterpart of yeast Cdc25." J.Biol.Chem.269. 15085-15091 (1994)

[文献書誌] Shimizu,K.,et al.: "Synergistic Activation by Ras and 14-3-3 Protein of a MAP Kinase Kinase Kinase Named Ras-dependent ERK Kinase Stimulator(REKS)." J.Biol.Chem.269. 22917-22920 (1994)

[文献書誌] Hirai,S.,et al.: "Ras-dependent signal transduction is indispensable but not sufficient for the activation op AP1/Jun by PKCδ." ENBOJ.13. 2331-2340 (1994)

[文献書誌] Wada,K.,et al.: "Localization of Rabphilin-3A,a putative target for Rab3A,at the sites of Ca^<2+>-dependent exocytosis in PC12 cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 158-165 (1994)

[文献書誌] Nakanishi,H.,et al.: "Kinetic properties of Ash/Grb2-interacting GDP/GTP exchange protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 1225-1261 (1994)

1994 年度実績報告書

貝淵弘三奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00169377)