胸腺内でのT細胞分化制御機構の分子化学的解析

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06265206
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 中山 俊憲 東京大学, 医学部(医), 助手 (50237468)
• キーワード: アポトーシス / 免疫抑制剤 / FS506 / サイクロスポリンA / ポジティブセレクション / ネガティブセレクション

研究概要

我々は早期活性化マーカー分子CD69を用いてポジティブセレクションの起こりつつある細胞群を同定した。ポジティブセレクションが起こる際とネガティブセレクションが起こる際に誘起されるシグナル伝達を次のような方法で解析しポジティブセレクションに特有のシグナル伝達機構の解明を目的とする。(1)細胞表面のTCRやCD69の量をフローサイトメトリーで、(2)チロシンキナーゼの活性化を抗チロシンリン酸抗体を使ったイムノブロッィング法で、(3)〔Ca^<2+>〕iの変化をコンピュータ画像解析装置(国立予防衛生研究所の鈴木和男博士の装置を利用)を用いて、(4)RAG-1、RAG-2といったT細胞のセレクションとともに発現の変化する分子のmRNAをノザンブロッティング法で解析した。免疫抑制剤であるFK506やサイクロスポリンAを用いてポジティブセレクションやネガティブセレクションのシグナル伝達系を解析したところ、胸腺内でのアポトーシスを伴うネガティブセレクションにはカルシニューリンの活性化は必要ないことがわかった。さらに、ポジティブセレクションついては、そのステップの最初の段階でカルシニューリンの活性化が必須であることがわかった。
さらには、末梢の成熟T細胞に誘導されるアポトーシスはFK506やサイクロスポリンAで完全に抑制されるため胸腺細胞でのアポトーシスと成熟T細胞でのアポトーシスは違ったメカニズムで起こっていることがわかった。

研究成果

• [文献書誌] Kubo,S.: "A novel form of self tolerance dictated in the thymus of transgenic mice with autoreactive T cell receptor α and β dhain genes." International Immunology. 6. 593-602 (1994)
• [文献書誌] Benvniste,P.: "Engagement of the external domalns of CD45 throsine phosphatase can regulate the differentiation of immature CD4+CD8+ thymocytes into mature T cells." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 91. 6933-6937 (1994)
• [文献書誌] Kearse,K.P.: "Developmentalrequlation of αβ T cell antigen receptor expression results form differentialstability of nascent TCRα proteihs within the endoplasmicreticulum of immature and mature T cells." EMBO Journal. 13. 4504-4514 (1994)
• [文献書誌] Wang,C-R.: "TCR-mediated signaling events in CD4+CD8+ thymocytes under goin thymic selection:Regulrement of calcineurin activation for thymic positive selection but not negative selection." Journal of Experimental Medicine. (印刷中).
• [文献書誌] V.Reeders: "T cell development in the thymus.Handbook of Experimental Immunology.(5th ed.)" Blackwell Scientific Publications, (1994)