ステロイドホルモンおよび受容体の神経細胞死に対する作用機構の解明

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06272228
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 河田 光博 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60112512)
• 研究分担者: 森田 規之 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (50239662) ; 由利 和也 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (10220534) ; 上田 秀一 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (60150570)
• キーワード: ステロイドホルモン / ステロイドホルモンレセプター / 細胞死 / 遺伝子発現調節 / 性差 / 脳分化機構

研究概要

胎仔・新生仔ラットの脳室内および脳実質内に、合成のグルココルチコイドであるデキサメサゾンを投与すると海馬の歯状回の顆粒細胞が特異的に細胞死をきたした。これらの変化は投与したデキサメサゾンの量、投与日数に比例していた。この領域はグルココルチコイドレセプターの分布が豊富なところであるため、グルココルチコイドレセプターの抗体作製に着手した。グルココルチコイドレセプター抗体の作製を行った。グルココルチコイドレセプターの転写調節ドメインをコードするcDNAが挿入されたイクスプレションベクターを用い、GST癒合タンパクを作製したのち、分離、精製し、ウサギを免疫し、活性の高い抗体を得た。特異性の検定にはイムノブロッティング法や免疫組織化学法を用いた。また、in vitro トランスクリプション法によってジゴキシゲン標識cRNAプローブをin situハイブリダイゼーションン検索のために作製した。また、in vitroトランスクリプション法によってジゴキシゲン標識cRNAプローブをin situハイブリダイゼーション検索のために作製した。現在、これらを用いてグルココルチコイドレセプターのアンチセンスDNAを組み込ませたレトロウィルスベクターを作製、C6グリオーマ細胞に感染させ、増殖が抑制されるかどうかの検討を行っており、ステロイドホルモンレセプターの増殖過程における検索が今後の研究課題として残った。エストロゲンレセプターの発現については、生直後のラット視床下部領域を中心にin situハイブリダイゼーション法を行っており、またエストロゲンレセプターの抗体による免疫組織化学法も併せて検討した。エストロゲンレセプターの発現は内側視束前核で雌雄差が顕著に認められ、この領域へのアンチセンスDNA投与によって性分化が修飾されることから、エストロゲンレセプターの脳分化過程における重要性が明確となった。

研究成果

• [文献書誌] 河田光博、上田陽一: "ラジオアイソトープ(RI)を用いるin situハイブリダイゼーション(ISH)法" 組織細胞化学1994. 140-143 (1994)
• [文献書誌] Yuri,K.and Kawata,M.: "Estrogen affects calcitonin gene-related peptide-and methionine-enkephaline-immunoreactive neuron in the female rat preoptic area." Neurosci Lett.,. 169. 5-8 (1994)
• [文献書誌] Yuri,K.,Kawata,M.: "Region-specific changes of tyrosine hydroxylase-immunoreactivity by estrogen treatment in female rat hypothalamus." Brain Res.645. 278-284 (1994)
• [文献書誌] Morimoto,M.,Morita,N.,Kawata,M.: "The effects of NGF and glucocorticoid on the cytological features of rat chromaffin cells in vitro." NeuroReport. 5. 945-956 (1994)
• [文献書誌] Kawata,M.,Yuri,K.and Morimoto,M: "Steroid hormone effects on gene expression,neuronal structure and differentiation." Hormones and Behavior. 28. 477-482 (1994)
• [文献書誌] Nishi,M.,Ueda,S.,Morita,N and Kawata,M.: "Effects of glucocorticoid on neurones of rat dentate gyrus in dissociated culture." NeuroReport. 5. 2446-2448 (1994)