心臓由来株化細胞におけるイオンチャネル発現に関する研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06274227
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 大地 陸男 順天堂大学, 医学部, 教授 (10049025)
• 研究分担者: 中村 健 東京薬科大, 生命科学部, 助手 (50227906)
• キーワード: 株化筋細胞 / 培養心筋 / カルシウムチャネル / カリウムチャネル / ジヒドロピリジン

研究概要

ラット胚心臓由来の株化筋細胞H9c2は培養によって単核筋芽細胞から多核の筋管細胞に分化する。細胞の分化に伴うイオンチャネルの発現をL型Caチャネルおよび外向きKチャネルに関してパッチクランプ法により検討した。またL型Caチャネルの発現を特異抗体を用いた生化学的方法で検討した。
1.L型Caチャネル
(1)増殖中の筋芽細胞から活性化・不活性化が速くCaよりBaに高い透過性を示す心筋型の特徴を持つジヒドロピリジン感受性のCa電流が記録された。(2)筋芽細胞のホールセル記録では骨格筋型のL型Ca電流が心筋型のより優位に記録された。しかし、単一電流記録を行うと、20pSの心筋型も12pSの骨格筋型と併存していた。(3)心筋型L型Caチャネルのα_1サブユニットに対する抗体を用いたウェスタンブロットでは、単核および多核いずれの細胞でも230kDおよび190kDのチャンル蛋白が発現していた。(4)骨格筋型L型Caチャネルα_1サブユニットに特異的な抗体を用いたウェスタンブロットによると筋芽細胞においてのみ165kDの骨格筋型L型チャネルの発現が認められた。
2.Kチャネル
ホールセル電流記録によって電位依存性Kチャネル(IKv)とCa依存性Kチャネル(IKCa)の発現が確認された。IKCaはcharydotoxin感受性成分とapamin感受性成分に分けられた。IKvは細胞の分化の全期にあり、一方IKCaは筋芽細胞にはなく筋管細胞に分化した後に発現した。

研究成果

• [文献書誌] T.Nakamura: "Expression of cardiac and skeletal muscle L-type Ca2+channels in a clonal cell line,H9c(2-1)" Jpn.J.Physiol.44. S146 (1994)
• [文献書誌] W.Wang: "Voltage-dependent-and Ca-activated-potassium channels inH9c2 clonal cell line from rat heart" Biophys.J.68. A40 (1995)
• [文献書誌] T.Iesaki: "Inhibition of vasoactive amine-induced contraction of vascular smooth muscle by hydrogen peoxide in rabbit aorta." Cardiovascular Res.28. 963-968 (1994)
• [文献書誌] K.Yumoto: "Depression of ATP-induced Ca2+signalling by high K+and low C1-media in human aortic endothelial cells" Jpn.J.Physiol.45. 111-122 (1995)
• [文献書誌] H.Sato: "Contribution of coronary endothelium to high resistance against hypoxia-reoxygenation injury in neonatal rat hearts." Pathophysiology. (in press).
• [文献書誌] M.Watanabe: "Indirect activation by internal calcium of chloride channels in endothelial cells" Jpn.J.Physiol.44(Suppl). S233-S236 (1994)