FISHによるヒトがん特異的微小欠失・増幅領域同定法の開発

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06281230
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 奥村 克純 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (30177183)
• キーワード: FISH / topoisomerase inhibitor / image analysis / chromosomal abnormality

研究概要

FISH法を利用して各種がんに特異的な欠失や増幅領域を同定し、細胞がん化のメカニズムの解明の一助とするために、FISHの解像度ならびに感度をあげることを目的として、以下の検討を行った。すなわち、(1)DNAトポイソメラーゼIIの阻害剤を利用する超伸展染色体の作製としてICRF193が有効であることを示した。(2)画像解析システムの応用として、PXL1400の冷却CCDカメラシステムを用いた遺伝子のマッピング、ならびにFISHシグナルの定量的解析を行う一方、本システムがComparative Genomic Hybridization(CGH)法にも使用しうることを示した。(3)intact cellの核からDNAファイバーを引き出すExtended Chromatin Fiber(ECF),固定細胞から調製するChromatin Release(CR)の簡便作製法の検討を行い、簡単に安定したファイバーが得られるように改良し、数Kbレベルの解像度が得られることを示した。(4)伸展度の低い染色体標本しか得にくい各種培養細胞株からの伸展染色体作製法として、超伸展染色体作製に使用したICRF193を低濃度に作用させることが有効であり、平均約2倍の長さの染色体が得られることを示すと共に、がんなどの異常のバンドレベルの解析に有効であることを示した。(5)がんなどによるゲノム異常部位の検出へのDNA複製解析法の応用として、FISHによるDNA複製タイミングの決定法を詳細に検討した。これにより、広範囲の領域にわたる微小異常部位の検索が可能であることを示唆した。以上の結果より、がんなどの異常を染色体レベルから数Kbレベルにわたって解析できる方法を開発・改良することができた。今後はこれらを実際のがん試料について検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Masayuki Seki: "Molecular Cloning of cDNA Encoding Human DNA Helicase Q1 Which Has Homology to Escherichia Coli Rec Q Helicase and Localizatin of the Gene at Chromosome 12p12" Nucleic Acid Research. 22. 4566-4573 (1994)
• [文献書誌] Hiroshi Akioka: "Isolation and Characterization of the HC8 Subunit Gene of the Human Proteasome" Biochem.Biophys.Res.Commn.207. 318-323 (1995)
• [文献書誌] Katsuzumi Okumura: "Assignment of the 36.5 kDa(RFC5),37kDa(RFC4),38kDa(RFC3),and 40kDa(RFC2) Subunit Genes of Human Replication Factor C to Chromosome Bands 12q24.2-q24.3,3q27,13q12.3-q13,and 7q11.23" Genomics. (印刷中). (1995)
• [文献書誌] Tatsuo Fukagawa: "A boundary of long-range G+Cc/c mosaic domains in the human MHC locus:Pseudoautosomal boundary-like sequence exists near the boundary" Genomics. (印刷中). (1995)
• [文献書誌] Katsuzumi Okumura: "The Genes for the α-Type HC3 and β-Type HC5 Subunits of Human Proteasomes Map to Chromosomes 6q27 and 7p12-p13 by Fluorescence in Situ Hybridization" Genomics. (印刷中). (1995)
• [文献書誌] 奥村克純: "FISHによるDNA複製タイミングの解析とゲノム・インプリンティング" 組織培養. (印刷中). (1995)
• [文献書誌] 松原謙一: "FISH実験プロトコール-ヒト・ゲノム解析から染色体・遺伝子診断まで-" 秀潤社, 219 (1994)
• [文献書誌] Takeshi Kobayashi: "Animal Cell Technology:Basic & Applied Aspects,Vol.6" Kluwer Academic Publishers,Netherland, 615 (1994)