1994 年度実績報告書

生体組織への遺伝子導入法を用いたがん治療の基礎研究

研究課題

研究課題/領域番号	06282235
研究機関	大阪大学
研究代表者	金田安史大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537)
キーワード	HVJ-リポソーム / アンチセンスオリゴヌクレオチド / 細胞増殖抑制 / E2F / 細胞周期調節因子 / がん治療 / 遺伝子治療
研究概要	HVJ-リポソーム法を用いて、細胞周期調節遺伝子のアンチセンスオリゴの投与による細胞周期の抑制を試みた。血清刺激によるVSMCの増殖は、PCNAとcdc2キナーゼのアンチセンスの組合わせ、cdc2キナーゼとcyclinB1或いはcdc2キナーゼのアンチセンスの組合わせにより完全に抑制され、この結果はin vivoにおいても証明された。次に、これを用いて、メラノーマの細胞増殖の抑制を試みた。培養ヒトメラノーマ細胞にPCNAとcdc2キナーゼのアンチセンスオリゴの導入を行なったが、センス投与群と比較し、有意な増殖抑制は認めなかった。そこでG1サイクリンであるcyclinD1或いはD3のアンチセンスオリゴをヒトメラノーマ細胞に導入し、3日後の^3H-チミジンの取り込みを調べたところ、サイクリンD1、D3のアンチセンス投与群はセンス投与群に比して、DNA合成能をほぼ90%抑制した。次に、2重鎖オリゴの導入による転写因子の抑制と細胞増殖の抑制を試みた。細胞増殖周期調節遺伝子(PCNAとcdc2キナーゼ)やある種のプロトオンコジーン(n-myc,c-myb)は、共通の転写因子E2Fにより、その転写が抑制されている。E2Fは、休止期にはRb等とcomplexを形成しているが、細胞周期がstartし、Rbがリン酸化されるとcomplexより遊離し、上記の遺伝子の上流に結合し、転写を促進する。その結合部位はTTTCGCGCというコンセンサス配列を有するので、このTTTCGCGCを含む20merの2重鎖DNAをHVJ-リポソームによりVSMCに導入し、その細胞増殖抑制効果を調べた。3μMのオリゴDNAの投与によりVSMCの血清刺激によるDNA合成能、増殖は完全に抑制された。in vivoにおけるVSMCの異常増殖も、同様の手法で1回の投与により8週間、70〜80%の抑制が得られた。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Morishita,R.: "Intimal hyperplasia after vascular injury is inhibited by.antisense cdk2 kinase oligonucleotides" J.Clin.lnvest.93. 1458-1464 (1994)
[文献書誌] Morishita,R.: "Autocrine and paracrine effects of atrial natriuretic peptide gene transfer on vascular smooth muscle and endothelial cellular growth." J.Clin.lnvest.94. 824-829 (1994)
[文献書誌] Tomita,N.: "A novel gene transfer technique mediated by HVJ(sendai virus),nuclear protein and llposomes" Cancer Diagnosis and Prevention. 18. 485-491 (1994)
[文献書誌] von der Leyen,H.: "Gene therapy inhibiting neointimal vascular lesion;In vivo transfer of endothelial cell nitric oxide synthase gene" Proc.Natl.Acad.Sci.(USA). 92. 1137-1141 (1995)
[文献書誌] Morishita,R.: "Pharmacokinetics of antisenseollgonucleotides(cycllN B1 and odc 2 kinase)In the vassel wall;onhanced therapeutic utlllty for restenosis by HVJ-llposome method." Gene. (in press).
[文献書誌] Morishita,R.: "Novel molecular strategy“decoys"against E2F binding site inhibits neointimal hyperplasia by intra-luminal approach" Proc.Natl.Acad.Sci.(USA). (in press).
[文献書誌] Imai,E.: "Extracellular matrix in the Kidney" Basel,Karger, 226 (1994)
[文献書誌] Kaneda,Y.: "Cell Biology:A laboratory Handbook" Academic Press lnc.,Orlando,Florida, 535 (1994)

1994 年度 実績報告書

生体組織への遺伝子導入法を用いたがん治療の基礎研究

研究代表者

金田 安史 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537)

研究成果

[文献書誌] Morishita,R.: "Intimal hyperplasia after vascular injury is inhibited by.antisense cdk2 kinase oligonucleotides" J.Clin.lnvest.93. 1458-1464 (1994)

[文献書誌] Morishita,R.: "Autocrine and paracrine effects of atrial natriuretic peptide gene transfer on vascular smooth muscle and endothelial cellular growth." J.Clin.lnvest.94. 824-829 (1994)

[文献書誌] Tomita,N.: "A novel gene transfer technique mediated by HVJ(sendai virus),nuclear protein and llposomes" Cancer Diagnosis and Prevention. 18. 485-491 (1994)

[文献書誌] von der Leyen,H.: "Gene therapy inhibiting neointimal vascular lesion;In vivo transfer of endothelial cell nitric oxide synthase gene" Proc.Natl.Acad.Sci.(USA). 92. 1137-1141 (1995)

[文献書誌] Morishita,R.: "Pharmacokinetics of antisenseollgonucleotides(cycllN B1 and odc 2 kinase)In the vassel wall;onhanced therapeutic utlllty for restenosis by HVJ-llposome method." Gene. (in press).

[文献書誌] Morishita,R.: "Novel molecular strategy“decoys"against E2F binding site inhibits neointimal hyperplasia by intra-luminal approach" Proc.Natl.Acad.Sci.(USA). (in press).

[文献書誌] Imai,E.: "Extracellular matrix in the Kidney" Basel,Karger, 226 (1994)

[文献書誌] Kaneda,Y.: "Cell Biology:A laboratory Handbook" Academic Press lnc.,Orlando,Florida, 535 (1994)

1994 年度実績報告書

金田安史大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537)