癌抑制遺伝子の単離とそのヒト癌における遺伝子異常の解明

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06283226
• 研究機関: (財)癌研究会
• 研究代表者: 中村 祐輔 (財)癌研究所, 生化学部, 部長 (70217909)
• 研究分担者: 江見 充 (財)癌研究所, 生化学部, 研究員 (90221118) ; 藤原 義之 (財)癌研究所, 生化学部, 研究員
• キーワード: 癌抑制遺伝子 / 第8染色体 / リンパ節転移 / 大腸癌 / 遺伝子診断

研究概要

第8染色体短腕には腫瘍における高頻度の染色体のヘテロ接合性の欠失が認められ、大腸癌、肝癌、肺癌などの発生・進展に関与する癌抑制遺伝子が存在すると考えられる。われわれは200例以上の癌における染色体欠失を多数の第8染色体短腕上の多型マーカーを用いて詳細に調べ、癌抑制遺伝子の存在すると考えられる領域を約800kbの範囲に限局化した。このゲノム領域をYACクローンやコスミドクローンによってカバーし、これを材料にしてExon-Trapping法を利用し複数のcDNAクローンを単離した。これらcDNAをプローブとしてサザン法によって約400例の腫瘍での異常の有無を調べたところ、1例の腫瘍において体細胞レベルでの遺伝子組換えのおこっていることを見いだした。このcDNAはPDGFレセプターの細胞外メインや癌遺伝子fltと高い相同性を示したことから、さらに詳細に癌組織での遺伝子異常を検索した。その結果、3例の癌において体細胞レベルの変異のおこっていることを見いだしたため、これを癌抑制遺伝子の候補遺伝子を考え、現在、生物学的な機能について解析を行っている。また、診断分野については、リンパ節転移の有無を遺伝子レベルで診断する試みを行った。その結果、遺伝子診断法と病理組織学的診断法とは大きな差異のあることが明らかとなった。さらに、病理学的にnoと診断されたのに再発した患者(再発群)とnoと診断され少なくとも5年以上再発が認められなかった患者(非再発群)で比較したところ再発群では27全例が遺伝子レベルでリンパ節転移陽性であったのに対して、非再発群では44例中10例のみが陽性であった。われわれの方法は1週間以内に判定することが可能であり、これを指標にして(1)術後のintensiveな化学療法を行うことにより転移をおさえる、あるいは(2)不必要な化学療法をさけることなどの臨床応用が可能ではないかと考えている。

研究成果

• [文献書誌] Y.Fujiwara,et al.: "A 3-Mb physical map of the region at chromosome 8p21.3-p22,including a 600-kb region commonly deleted in human hepato-cellular carcinoma,colorectal cancer,and non-small cell lung cancer." Genes chromosomes Cancer. 10. 7-14 (1994)
• [文献書誌] T.Mori,et al.: "Frequent loss of heterozygosity in the region including BRCA1 on chromosome 17q in squamous cell carcinomas of the esophagus." Cancer Research. 54. 1638-1640 (1994)
• [文献書誌] N.Hayashi,et al.: "Genetic diagnosis identifies occult lymph node metastases undetectable by the histopathological method." Cancer Research. 54. 3853-3856 (1994)
• [文献書誌] A.Horii,et al.: "Frequent replication errors at microsatellite loci in tumors of patients with multiple primary cancers." Cancer Research. 54. 3373-3375 (1994)
• [文献書誌] Y.Fujiwara,et al.: "Isolation of a candidate tumor suppressor gene on chromosome 8p21.3-p22 that is homologous to an extracellular domain of the PDGF receptor beta gene." Oncogene. (in press).
• [文献書誌] Y.Hasegawa,et al.: "Detection of K-ras mutation from feces of patients with colorectal tumors by mutant-allele-specific amplification(MASA)." Oncogene. (in press).