| 研究概要 |
本年度は組換え中間体Holliday構造の分岐点移動をATP分解のエネルギーを利用して行わせるRecGタンパク質と、同様の機能をもつRuvA・RuvBタンパク質の機能の比較、Holliday分岐点を切断して解離するRuvCとHolliday junctionの相互作用などを解析して以下の結果を得た。
1. RecGタンパク質がColEプラスミドの複製開始領域に形成されるRループをATP依存的に解離させ、ColE1 DNAの複製を抑える活性をもつことを証明し、論文にまとめて発表した。
2. RucCの基質特異性を種々の合成Holliday junctionを作成して解析し、切断部位にチミン(又はアデニン)が存在することが重要であるが、junctionでは塩基配列の対称性(相同性)は重要でないことを明らかにし、論文にまとめて発表した。
3.緑膿菌のruvA, ruvB, ruvCをクローニングし、構造と機能を解析した。緑膿菌のこれらの遺伝子は大腸菌のruvABCと同様の機能をもつことを示した。
4.耐熱菌Thermas thermophilusのRuvBタンパク質の多量生産系をつくり、このタンパクを精製し、生化学的諸性質を解析した。
5. DNA修復におけるruvA, ruvB, ruvCおよびrecGのin vivoでの役割を解析するためにこれらのミュータントを作成し、細胞と染色体の構造を観察した。これらのミュータントは染色体分離に欠陥があることを見つけた。これらの結果を論文にまとめた。
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