視物質の進化と膜性構造の分化:抗体作製と電顕免疫組織化学

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06405001
• 研究機関: 山形大学
• 研究代表者: 外崎 昭 山形大学, 医学部, 教授 (90004572)
• 研究分担者: 森 慶二 山形大学, 医学部, 助手 (40250914) ; 佐々木 克典 山形大学, 医学部, 助教授 (30170666) ; 徳永 史生 大阪大学, 理学部, 教授 (80025452)
• キーワード: 網膜 / 単クローン抗体 / 免疫組織化学 / 電顕免疫組織化学 / ヤツメウナギ / 光受容細胞の分化

研究概要

1.ヤツメウナギ網膜を抗原とする単クローン抗体の作製と抗原性の分析:
新に10種類の抗体を作製し、Western-blott法及び自家網膜による組織化学により、性格の検討を行った:1)W39抗体.40kD及び94kDに陽性反応帯を示し、短光受容細胞外節に強い結合を示した。2)W425抗体.49kDに陽性反応帯を示し、外節、内節、核周部、軸策及び軸策終末膨大を含む、短光受容細胞の全領域に強い結合を示した。3)W231抗体.40kD及び42kDに陽性反応帯を示し、短光受容細胞内節と網膜脳層全域に強い結合性を示した。4)W15抗体.57kDに陽性反応帯を示し、短光受容細胞の外節及び内節、さらに網膜脳層全域に強い結合性を示した。
2.新しい抗体の異種網膜に対する組織化学反応性の検討:
キンギョとハムスターの網膜に対するW39抗体、W425抗体、W231組織化学的反応性を検討した。
3.電顕レベルにおける免疫反応の検出と細胞微細構造の保存性の検討:
単クローン抗体の免疫組織反応は、大まかな細胞領域の反応性として観察される。これを特定の微細構造、とくに膜性構造との関係を厳密に分析するため、網膜細胞の化学固定の初期に高周波照射を併用し、固定液の浸透を促す方法を検討した。
結論:
ヤツメウナギ網膜の多様な細胞要素を抗原とする単クローン抗体は、着々と種類を増している。抗原部位を認識するレベルを電顕レベルに置き、膜性構造との厳密な関係を検討することが当面の目標である。平成8年度には、特異性の高い単クローン抗体の異種網膜との交叉反応性を中心として研究を進める予定である。

研究成果

• [文献書誌] Yamaguchi K, Takahashi S, Sasaki K, Tonosaki A: "Immuno-scanning electron microscopical analysis of intercellular adhesion molecule-1 in the corneal endothelium involved in endotoxin induced uveitis.(Abs)" Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.36. 294 (1995)
• [文献書誌] Hattori R, Watanabe H, Tonosaki A, Hattori T: "Unusual morphology of Agromonas oligotrophica and the effect of NaCl and organic nutrient on its fine structure." J. Gen. Appl. Microbiol.41. 23-30 (1995)
• [文献書誌] Shao F, Tonosaki A, Watanabe Y: "Vincula tendinum of human hands with special reference to vascular patency." Acta Anat. Nippon.70. 569-576 (1995)
• [文献書誌] Katori Y, Tonosaki A, Takasaka T: "WGA lectin binding sites of the apical surface of Corti epithelium: Enhancement by back-scattered electron imaging in guinea-pig inner ear." J. Electr. Microsc.(in press).
• [文献書誌] Ishikawa M, Johnson LV, DeWing MD, Koseki T, Tonosaki A, Sakuragi S: "pH-dependent changes in interphotoreceptor matrix domains surrounding cone photoreceptors." Ophthalmic Res.(in press).
• [文献書誌] Yamaguchi K, Takahashi S, Takahashi Y, Shoji T, Yuki Y, Sasaki K, Tonosaki T: "Distribution of intercellular adhesion molecule-1 on leukocytes and corneal ednodthelium after endotoxin stimulation in rats." Internat. Ophthalmol.(in press).
• [文献書誌] Yamaguchi K, Takahashi S, Sasaki K, Tonosaki A: "Early expression of intercellular adhesion molecule-1 in the corneal edndothelium stimulated by edotoxin: An immuno-scanninng electron microscopical analysis." Jap. J. Ophthalmol.(in press).