| 研究課題/領域番号 |
06453168
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
熊谷 英彦 京都大学, 農学部, 教授 (70027192)
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| 研究分担者 |
玉置 尚徳 京都大学, 農学部, 助手 (20212045)
鈴木 秀之 京都大学, 農学部, 助手 (10202136)
山本 憲二 京都大学, 農学部, 助教授 (70109049)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1996
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| キーワード | γ-グルタミルトランスペプチダーゼ / モノアミン酸化酵素, / チロシンフェノールリアーゼ / ビフィズス菌 / β-グルコシダーゼ / アミン酸化酵素, / グルタチオン-S-トランスフェラーゼ |
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| 研究概要 |
1. (1)チロシンフェノールリアーゼの活性中心リジン257をアラニンに置換した変異酵素を大量発現する系を大腸菌およびT7ファージを用いる系で構築した。(2)同酵素遺伝子の転写開始点および活性調節部分を解析した。プロモーター部分にレポーター遺伝子を連結したプラスミドを用いて、大腸菌中で発現調節因子の遺伝子tyrRとチロシンの制御を受けることを明らかにした。
2. (1)γ-グルタミルトランスペプチダーゼの主鎖構造を明らかにした。(2)同酵素のセリン33をシステインに置換した変異酵素を作成し、その重金属同位体の結晶解析を行った。(3)本酵素の低温依存性高発現の機構を検討し、mRNAの低温での高発現と安定性に起因することを明らかにした。
3. (1)大腸菌のモノアミン酸化酵素が銅イオンによって誘導されることを明らかにし、転写の段階で調節が行われていることを確認した。(2)同酵素の生合成調節遺伝子によるチラミン依存性誘導とカタボライト抑制の調節機構を明らかにした。(3)調節遺伝子を高発現したときに生成する黄色酵素の精製、性質の解明、結晶構造解析を行った。
4.カビのアミン酸化酵素の銅結合部位ヒスチジン残基を、また活性発現に関与するアミノ酸残基を部位特異的変異により決定した。
5.酵母のグルタチオンS-トランスフェラーゼアイソザイムの遺伝子をクローニングすることに成功し、高発現した酵素の精製と性質の解明を行った。
6.ビフィドバクテリウムのβ-グルコシダーゼの遺伝子を大腸菌でクローニングし、大量発現株より精製純化した酵素の結晶を作成した。
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