サーファクタント・アポ蛋白の肺胞細胞受容体を介する機能発現の分子機構

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06453182
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 秋野 豊明 札幌医科大学, 医学部, 教授 (80045377)
• 研究分担者: 相馬 仁 札幌医科大学, 医学部, 講師 (70226702) ; 黒木 由夫 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (70161784)
• キーワード: サーファクタント蛋白質 / 脂質結合蛋白質 / C型レクチン / 肺胞II型細胞 / アネキシン / リン脂質代謝 / 受容体

研究概要

本研究は、肺胞II型細胞、および、肺胞マクロファージの機能調節におけるサーファクタント蛋白質(SP-AおよびSP-D)関与の分子機構を解明することを目的とする。平成6年度の研究計画は概ね達成された。新たに得られた知見は下記の通りである。
1.ペプチドマッピングの結果より、SP-A受容体への結合、および、生物活性発現を阻止しうる抗SP-A単クローン抗体(PE10)エピトープは、C末端側領域のGlu^<202>からMet^<207>を含む部分であることを明らかにした。さらに、この領域を含むペプチドを合成し、抗ペプチド抗体を得た。この抗体は、SP-Aの肺胞II型細胞に対する生物活性を完全に阻止し、Glu^<202>からMet^<207>を含む部分がSP-Aの生物活性の発現に直接、関与することを証明した。
2.細胞内におけるSP-Aの機能を調べる目的で、SP-Aにカルシウム依存的に結合する可溶性因子の存在を検討した。ウシ肺細胞質画分に存在する蛋白質の中でSP-A-セファロース4Bカラムに結合した分子量32kDaの主要蛋白質の部分アミノ酸配列を調べた結果、アネキシンIVであることが判明し、肺胞II型細胞からのサーファクタント分泌においてアネキシンIVがSP-Aを介して分泌の調節を行なっている可能性が示唆された。
3.ヒトおよびラットSP-A単クローン抗体に対する抗イディオタイプ抗体を作成し、SP-Aの肺胞II型細胞に対する結合を阻止しうる抗体を得た。抗イディオタイプ抗体の認識する分子が、SP-A受容体であることが示唆され、その分子の同定を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Inoue,T.: "Enzyme-linked immunoassay for human pulmonary surfactant protein D." J.Immunol.Methods. 173. 157-164 (1994)
• [文献書誌] Kuroki,Y.: "Pulmonary surfactant proteins." J.Biol.Chem.269. 25943-25946 (1994)
• [文献書誌] Kuroki,Y.: "Epitope mapping for monoclonal antibodies identifies functional domains of pulmonary surfactant protein A that interact with lipid" J.Biol.Chem.269. 29793-29800 (1994)
• [文献書誌] 黒木 由夫: "C型レクチンに属する肺サーファクタント・アポタンパク質の脂質結合特異性" 生化学. 66. 53-57 (1994)
• [文献書誌] 秋野 豊明: "ぴまん性肺疾患と肺サーファクタントの変動" 医学のあゆみ. 168. 670-674 (1994)
• [文献書誌] 秋野 豊明: "サーファクタントの生化学と今後の臨床展望" 日本未熟児新生児誌. 6. 13-22 (1994)
• [文献書誌] 日野 修一郎: "高感度ヒト肺サーファクタント蛋白A測定キットの開発" 医学と薬学. 32. 827-836 (1994)
• [文献書誌] 小笠原 由法: "肺サーファクタント蛋白質の構造と機能" The Lipids. 5. 440-447 (1994)
• [文献書誌] Honda,Y.: "Aberrant appearance of lung surfactant protein A in sera of patien with idiopathic pulmonary fibrosis and its clinical significance." Respiration. (in press). (1995)
• [文献書誌] Hiraike,N.: "Epitope mapping for monoclonal antibody against human surfactant protein A(SP-A)that alters receptor binding of SP-A and the SP-A" Biochim.Biophys.Acta. in press (1995)
• [文献書誌] Honda,Y.: "Determination of surfactant protein A in sera and bronchoalveolar lavage fluids of patients with pulmonary alveolar proteinosis." Eur.Respir.J.(in press). (1995)