| 研究概要 |
ミオシン結合蛋白質の一つC-蛋白質について、心筋型アイソフォームを対象にして分子内機能ドメインを解析し、さらに筋原繊維形成が進行する発生途上の筋で発現されるC-蛋白質アイソフォームをトリと哺乳類を比較しながら検討した。既にニワトリ心筋C-蛋白質cDNAを分離、全構造を決定したが、cDNAの解析の過程で、15アミノ酸残基からなる挿入配列をもつタイプ(I型)ともたないタイプ(II型)の2種の変異体を見出した。この領域のアミノ酸配列の意義をデータベースに基づいて検討した結果、この部位はC-蛋白質の機能制御に関わる重要なリン酸化部位であることが明らかになった。また蛋白質のC端側、N端側から様々の程度に欠損する変異体をcDNAトランスフェクション法により筋細胞内で発現させて、集合を解析した結果、C端側のイムノグロブリンC2ドメインがC-蛋白質の構造への集合に欠かせないことを確認した。ニワトリの筋発生過程では心筋はもとより骨格筋でも発生初期に、心筋C-蛋白質が主要成分として発現されることを既に見出したが、今回さらに、ニワトリ心筋C-蛋白質のI型、II型の発現パターンをRT-PCR法により解析の結果、発生過程を通じて心筋ではI型が、骨格筋ではII型が主であることが明らかになった。次に、ノワトリでみられたC-蛋白質の発現変化を哺乳類でも検証する目的で、マウスの発生過程でのC-蛋白質アイソフォームの発現の特徴を調べた。既に知られたヒトC-蛋白質cDNAをプローブとして、マウス骨格筋(速筋型、遅筋型)C-蛋白質cDNAを得、これらとマウス心筋C-蛋白質cDNA(Kasahara et al.,1994)を用いて、ノーザーンブロット法により親および胎児筋での発現を調べた結果、親では心筋、ヒラメ筋(遅筋)ではそれぞれ心筋型、遅筋型C-蛋白質のみが検出されたが、代表的な速筋とされる長指伸筋(EDL)では速筋型、遅筋型いずれもが検出された。また胎児や新生児では、心筋C-蛋白は心筋では発現されるものの、骨格筋ではニワトリの場合と異なり、心筋C-蛋白質の発現は全く見られなかった。心筋C-蛋白質の役割を考える上でニワトリとマウスの違いは興味深い。
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