retプロトオンコジーンの腸管神経系形成における役割

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454192
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 高橋 雅英 名古屋大学, 医学部, 助教授 (40183446)
• 研究分担者: 渡辺 芳夫 名古屋大学, 医学部, 助手 (80201242)
• キーワード: retプロトオンコジーン / チロシンキナーゼ / 腸管神経 / Hirschosprung病

研究概要

retプロトオンコジーンは細胞外ドメインにカドヘリン様構造を有するユニークな受容体型チロシンキナーゼをコードし、腸管の神経節細胞の分化異常によって生じるHirschsprung病において、そのgerm-line mutationが存在することが明らかになっている。本年度の研究においてはHirschsprung病に検出された変異をret cDNAに導入し、培養細胞に発現させることにより、変異型Ret蛋白によるHirschsprung病の発症機構の解析を行った。
まずHirschsprung病の患者にてret遺伝子の細胞外ドメインに検出された5種の変異をそれぞれ導入後、マウス線維芽細胞NIH3T3にトランスフェクトし、変異型Ret蛋白の発現を調べた。われわれはすでにRet蛋白が細胞表面に存在する170kDaの成熟型の糖蛋白と小胞体に存在する150kDaの未成熟型の糖蛋白として発現することを証明している。今回、Hirschsprung病型変異を導入すると150kDaのRet蛋白の発現は変化しないものの、170kDaのRet蛋白の発現が著しく低下することが判明した。この結果は、Hirschsprung病型変異がRet蛋白の小胞体から細胞表面への輸送を障害したことを示唆した。Hirschsprung病は障害をうける腸管の長さの違いによりlong segmentタイプとshort segmentタイプに分類される。long segmentタイプを生じる変異とshort segmentタイプを生じる変異を比較すると、前者で170kDaの蛋白の発現がより強く抑制された。よってHirschpsrung病ではRet蛋白が細胞表面へ移行できなくなることにより、リガンドとの結合が起きず、腸管神経細胞が正常に分化できなくなるものと推定された。

研究成果

• [文献書誌] Toyonori Tsuzuki: "Spatial and temporal expression of the ret proto-oncogene product in embryonic,infant and adult rat tissues." Oncogene. 10. 191-198 (1995)
• [文献書誌] Naoya Asai: "Mechanism of acitvation of the ret proto-oncogene by multiple endocrine neoplasia 2A mutations." Mol.Cell.Biol.15. 1613-1619 (1995)
• [文献書誌] Yoshio Watanabe: "Expression of ret proto-oncogene products in the hypoganglionic segment of the small intestine of congenital aganglionosis rats." J.Pediatr.Surg.30. 641-645 (1995)
• [文献書誌] Masahide Takahashi: "Oncogenic activation of the ret proto-oncogene in thyroid cancer." Crit.Rev.in Oncogenesis. 6. 35-46 (1995)
• [文献書誌] Masaki Wada: "Detecion of Ret homodimers in MEN 2A-associated pheochromocytomas." Biochem.Biophys.Res.Commun.218. 606-609 (1996)
• [文献書誌] Toshihide Iwashita: "Identification of tyrosine residues that are essential for transforming activity of the ret proto-oncogene with MEN 2A or MEN 2B mutation." Oncogene. 12. 481-487 (1996)