EBウイルス前初期遺伝子蛋白(ZEBRA)のリン酸化

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454213
• 研究機関: 国立予防衛生研究所
• 研究代表者: 西連寺 剛 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 主任研究官 (10117351)
• 研究分担者: 松田 道行 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 主任研究官 (10199812) ; 小島 朝人 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 室長 (30100077)
• キーワード: EBウイルス(EBV) / EBV 前初期遺伝子蛋白(ZEBRA) / ZEBRA分子の多様性 / ZEBRAのリン酸化

研究概要

1.ZEBRAのmAbの作成:ZEBRA発現E.coli(Trp-E ZEBRA)をG.Miller(エール大)より、更にGST-ZEBRA発現E.coliをE.Flemington(ハーバード大)より分与受け、ZEBRAの産生及び精製が可能になった。E.coli発現Trp-E fusion ZEBRA(unspliced,71Kd)をBalb/cマウスに免疫し、ハイブリドーマを得た。抗ZEBRA活性をELISA法、Western Blotting法、間接蛍光抗体法で、スクリーニングし、ZEBRAを認識するmAb,6B10(IgG_1,λ)を得た。6B10 mAbはTrp-E ZEBRA,GST-ZEBRA,Akata,P3HR-1,P3HR-1 ウイルス重感染Raji細胞でのZEBRAを認識した。この成功により、ZEBRAの免疫生化学的実験が可能になった。
ZEBRA分子の多様性の解析:6B10 mAbを用いて、種々のEBVトランスフォームB細胞に発現されるZEBRAの分子をWestern blotting法で調べZEBRA分子の多様性を解析した。EBVトランスフォーム細胞株によって発現されるZEBRAの分子量の違いが明らかになった。
Akata、B95-8細胞のZEBRAは39Kd及び36.5Kdで、P3HR-1では38Kdと37Kdの分子量を異にする2分子のZEBRAが検出された。P3HR-1細胞では37Kd及び36KdのZEBRAが認められた。これがG.Millerの言うhet ZEBRA及びstandard ZEBRAと一致した。P3HR-1 EBV(het及びstandardを含む)をRaji細胞へ感染させたところ、standard ZEBRA分子が強く発現され、それに加え弱いhet ZEBRAの発現も見られた。またB95-8 EBV,及びAkata EBVを用いて、同一成人末梢リンパ球をトランスフォームした細胞では、それぞれのウイルスBZLF1遺伝子によるZEBRA分子量の発現が見られた。
3.ZEBRAのリン酸化:ZEBRAのアミノ酸配列から、ZEBRA 245分子内にカゼインキナーゼII(CK II)及びプロテインキナーゼによるリン酸化領域の存在が確かめられた。特に核内CKIIによるリン酸化はZEBRAのDNA結合及び転写活性化領域に存在し、その機能発現に重要と思われる。

研究成果

• [文献書誌] Asada,H.,et al.: "Establishment and characterization of the T-cell line,EBT-8 latently infected with Epstein-Barr virus from large granular lymphocyte leukemia." Leukemia. 8. 1415-1423 (1994)
• [文献書誌] Daibata,M.,et al.: "Regulation of the BZLFl promoter Epstein-Barr virus by second messengers and anti-immunoglobul in-treated cells." Virology. 198. 446-454 (1994)
• [文献書誌] Tachibana,Y.,et al.: "A major antigenic region of the integrase 〔IN〕 of human immunodeficiency virus type 1 as determined by reactivity of human sera and a monoclonal antibody to IN." Clin.Diag.Lab.Immunol.1. 673-683 (1994)
• [文献書誌] Tanaka,S.,et al.: "C3G,a guanine nucleotide-releasing protein expressed ubiquitously,binds to the Src homology 3 domains of CRK and GRB2/ASH proteins" Proc.Natl.Acad.Sci.LISA. 91. 3443-3447 (1994)
• [文献書誌] Matsuda,M.,et al.: "CRK protein bindsto two guanine nucleotide-releasing proteins for the Ras family and modulates neive growth factor-induced activation of Ras in PC12 cells" Mol.Cell.Biol.14. 5495-5499 (1994)
• [文献書誌] Takai,S.,et al.: "Mapping of the human C3G gene coding a guanine nucleotide releasing protein for Ras family to 9 & 34.3 by fluorescence in situ hybridization" Hum.Genet.94. 549-550 (1994)