EBウイルス前初期遺伝子蛋白(ZEBRA)のリン酸化

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454213
• 研究機関: 国立予防衛生研究所
• 研究代表者: 西連寺 剛 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 室長 (10117351)
• 研究分担者: 松田 道行 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 主任研究官 (10199812) ; 小島 朝人 国立予防衛生研究所, 感染病理部, 室長 (30100077)
• キーワード: EBウイルス / EBV前初期遺伝子蛋白(ZEBRA) / ZEBRA分子の多様性 / EBV活性化 / EBV遺伝子発現 / IL-10

研究概要

1.EBウイルス(EBV)前初期遺伝子BZLF1蛋白、ZEBRA分子の多様性について:
EBV前初期遺伝子BZLF1蛋白、ZEBRAは、EBV活性化を開始させ、EBV複製サイクルを促進する転写因子である。ZEBRAに対するモノクローナル抗体で、Akata, B95-8及びP3HR-1細胞で発現されるZEBRAの分子量の違いを明らかにした。更に種々のEBV株によってトランスフォームしたB細胞株及びEBV重感染によるZEBRAの発現及び多様性の機構を解析した。(1)同一成人からのヒト末梢Bリンパ球をAkataまたはB95-8 EBVでトランスフォームした細胞株では、それぞれAkataまたはB95-8細胞で発現される39及び36KdのZEBRAが検出された。
(2)異なったヒト由来B細胞株では種々の分子量を持つZEBRAが検出された。(3)EBV重感染では、内在EBVゲノムのコードするZEBRAのみが検出され、外から感染させたEBV遺伝子発現によるZEBRAは検出されなかった。(4)種々のEBV感染B細胞株でBZLF1 PCR産物の制限酵素断片に差異が認められた。ZEBRA分子の多形性は細胞内に潜在するEBVの遺伝子を反映し、この性状はEBVの宿主が変っても保存される。重感染によるZEBRAの発現は、内在EBV遺伝子から誘導されるものと考えられた。
2.EBVの活性化とインターロイキン10 (IL-10)産生について:
ヒト(h)IL-10とEBV遺伝子BCRF1蛋白であるウイルス(v)IL-10は、高い遺伝子ホモロジーを持ち、T細胞増殖やIL-2産生を抑制し、B細胞の分化、増殖活性を持つことから、EBV感染疾患との関連が示唆されている。EBV活性化に伴って発現されるIL-10の産生状態を解析し、EBV感染におけるvIL-10産生の機構を明らかにした。(1)種々のEBVゲノム(+)及び(-)細胞株においてhIL-10の産生は検出されたが、vIL-10の産生は検出されなかった。(2)潜在Akata細胞を抗ヒトIgGで、潜在EBVを活性化すると、hIL-10及びvIL-10の著しい誘導が見られた。hIL-10及びvIL-10の産生は、抗IgG添加後それぞれ6hr及び10hrで開始され、EBV活性化と共に増加した。(3)vIL-10の産生はAkata細胞へP3HR-1 EBVの重感染でも誘導された。(4)vIL-10の産生はヘルペスウイルスDNAポリメラーゼ阻害剤ホスフォノ酢酸により抑制された。
本研究はEBV遺伝子の活性化に伴って多量のh及びvIL-10が誘導されることを明らかにした。vIL-10はウイルス後期遺伝子の発現の関与を示した。

研究成果

• [文献書誌] Sairenji, T., et al.: "Antibody responses to Epstein-Barr virus, human herpesvirus 6 and human herpesvirus 7 in patients with Chronic fatigue Syndrome" Intervirology. 38. 269-273 (1995)
• [文献書誌] Hara, K., et al.: "Normal activation of p70 S6 Kinase by insulin in cells overexpressing dominant negative 85KD subunit of phosphoincsitide 3-Kinase" Biochem. Biophys. Res. Commun.208. 735-741 (1995)
• [文献書誌] Takahashi, H. et al.: "HIV-1 reverse transcriptase : Enhancement of activity by interactions with the nucleocapsid p15 protein and cellular topoisomerase 1" Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92. 5694-5698 (1995)
• [文献書誌] Daduang, S. et al.: "Production of monodonal antibodies specific to the carboxyl terminal nagion of the 85KDa subunit of phosphotidyliocsitol 3-kinase" Immunol. Cell Biol.73. 134-139 (1995)
• [文献書誌] Gofoh, T. et al.: "Identification of Rapl as a target for the Crk SH3 domain-binding guanine nucleotide-releasing factor C3G" Mol. Cell. Biol.15. 6746-6753 (1995)
• [文献書誌] Hasegawa, H. et al.: "DOCK180, a major CRK-binding protein, alters cell morphology upon translocation to the cell membrane" Mol. Cell. Biol.16. (1996)