アンチセンスDNAを用いたウイルス肝炎の遺伝子治療の基礎的研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454262
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 林 紀夫 大阪大学, 医学部, 講師 (00144478)
• 研究分担者: 萩原 秀紀 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 三田 英治 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 竹原 徹郎 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 笠原 彰紀 大阪大学, 医学部, 助手 (70214286)
• キーワード: アンチセンスDNA / ウイルス肝炎 / 遺伝子治療 / アシアログリコプロテイン / βガラクトシダーゼ / クロロキン / HcpG2 / 肝細胞

研究概要

アシアロ法による遺伝子導入効率の向上のために、肝癌由来細胞株HepG2にβ-galactosidaseを導入する系で、種々の条件の最適化を行った。(1)Carrier:DNA比については、モル比にして160:1から16000:1について検討し、480:1にて最適となった。前後のモル比では、最適化時に比して著しく効率が低く、Carrier:DNA比は遺伝子導入効率に関して非常に重要な条件であった。過去のアシアロ法での報告では、、Carrier:DNA比は、gel retardtion assayにて決定されてきたが、この方法で決定されたCarrier:DNA比(160:1)での効率は、実際に遺伝子導入を行って決定された最適化での効率に比して著名に低く、条件の最適化が実際に遺伝子導入を行って決定されるべきものであることが明らかとなった。(2)リソゾーム酵素阻害剤であるクロロキンの効果について検討したところ、培養液中に50μM添加することで、遺伝子導入酵率を10倍以上に引き上げることができた。(3)この系におけるリセプター特異性を検討するために、架橋しないアシアロ・オルソムコイドとポリリジンをCarrierに用いて遺伝子導入を行ったが導入されず本法での遺伝子導入がアシアログリコプロテインリセプターを介して行われていることが確かめられた。これらのことを通じてアシアロ法における遺伝子導入効率を100倍向上させ、in vivoでの検討が可能なレベルに引き上げることができた。

研究成果

• [文献書誌] Yuki N,Hayashi N,Hagiwara H,et al.: "Hepatitis C virus replication and antibodies tostructura and nonstructural viral proteins in chronic hepatitis C." Journal of Hepatology. 20. 421-425 (1994)
• [文献書誌] Naito M,hayashi N,Hagiwara H,et al.: "Serum Hepatitis C virus RNA quantity and histological features of hepatitis C virus carriers with persistentl normal ALT Levels." Hepatology. 19. 871-875 (1994)
• [文献書誌] Yuki N,Hayashi N,Kasahara A,et al.: "IgG and IgM core antibodies and viral replication in hepatitis C virus carriers." Journal of Hepatology. 21. 110-114 (1994)
• [文献書誌] Mita E,Hayashi N,Kanazawa Y,et al.: "Hepatitis C virus genotype and RNA titers in the progression of type C chronic liver disease." Journal of Hepatology. 21. 468-473 (1994)
• [文献書誌] Moribe T,Hayashi N.Kanazawa Y,et al.: "Detection of hepatitis C virus quasispecies through single strand conformation polymorphism." Gastroenterology. (in press).
• [文献書誌] Kasahara A,Hayashi N,Hiramatsu N,et al.: "Ability oh prolonged interferon treatment to suppress relapse after cessation of therapy in patients with chronic hepatitis C." Hepatology. (in press).