1994 年度実績報告書

レチノイン酸支配下の成長因子ミッドカインの受容体構造と活性阻害

研究課題

研究課題/領域番号	06454645
研究機関	名古屋大学
研究代表者	村松喬名古屋大学, 医学部, 教授 (00030891)
研究分担者	村松寿子名古屋大学, 医学部, 助手 (50182134) 門松健治名古屋大学, 医学部, 講師 (80204519) 金田典夫名古屋大学, 医学部, 助教授 (00144139)
キーワード	ミッドカイン / レチノイン酸 / ヘパリン / ヘパラン硫酸 / 神経突起伸長 / プラズミノーゲン活性化酵素
研究概要	N末端領域、C末端領域を欠失させたミッドカイン(MK)を遺伝子操作によって作成し、化学合成したMKのN末端1/2分子、C末端1/2分子と共にMKの活性を示すかどうかを検討した。その結果、神経突起の伸長には、MKのC末端1/2のみで十分な活性があり、さらに血管内皮細胞のプラズミノーゲン活性化酵素の活性増大には、C末端1/2分子中のシステインに囲まれた43アミノ酸残基ペプチドで活性があることが判明した。MKのヘパリン結合能はC末端1/2分子が主として担っていた。MKの抗原性はC末端ペプチドが担っていた。バキュロウイルス発現系を利用して、MKの大量調整を行った。このMKをシャーレにコートし、その上にグリッドを置いてから紫外線照射し、MKの“道"を作り、神経突起伸長能をより明確にアッセイ出来るようにした。このアッセイ系ではヘパリンが0.6μg/mlの濃度で神経突起伸長を阻害し、ヘパラン硫酸には強い阻害活性はなかった。また、MKとヘパラン硫酸プロテオグリカンであるシンデカン-1、そしてリュードカン(シンデカン-4)が強い結合をする事も明かになった。以上の結果をまとめ、MKとヘパラン硫酸プロテオグリカン中のヘパリン様部分との結合がMK活性の発現に極めて重要であると結論した。これ以外のMK受容体タンパク質が存在する可能性を考え、PYS-2細胞からMK結合タンパク質群を単離した。その主成分はヌクオリンであったが、副成分について、抗体作成による発現ライブラリースクリーニングによって同定を進めている。MKが歯芽の発生に於て重要な役割を果たす事、実験的脳梗塞に於て早期に発現する事も明かに出来た。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Muramatsu,H.et al.: "Localization of heparin-binding,neurite outgrowth and antigenic regions in midkine molecule" Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1131-1139 (1994)
[文献書誌] Take,M.et al.: "Identification of nucleolin as a binding protein for midkine(MK)and heparin-binding growth-associated molecule(HB-GAM)" J.Biochem. 116. 1063-1068 (1994)
[文献書誌] Kojima,S.et al.: "Synthetic peptides derived from midkine enhances plasminogen activator in bovine aortic endothelial cells" Biochem.Biophys.Res Commun.206. 468-473 (1995)
[文献書誌] Yoshida,Y.et al.: "Midkine is present in the early stage cerebral infarct" Dev.Brain Res.(in press). (1995)
[文献書誌] Mitsiadis,T.A.et al: "Midkine(MK),a heparin-binding growth/differecntiation factor,is regulated by retinoic acid and epitheloal-mcsenchymal interactionsin the developing mouse tooth,and affects cell proliferation and morphogenesis" J.Cell Biol.(in press). (1995)
[文献書誌] Mitsiadis,T.A.et al: "Expression of the heparin-binding cytokines,midkine(MK)and-HB-GAM(pleiotrophin)is associated with epithelial-mesenchymal interactions during fetal development an organogenesis" Development. 121. 37-51 (1995)

1994 年度 実績報告書

レチノイン酸支配下の成長因子ミッドカインの受容体構造と活性阻害

研究代表者

村松 喬 名古屋大学, 医学部, 教授 (00030891)

研究成果

[文献書誌] Muramatsu,H.et al.: "Localization of heparin-binding,neurite outgrowth and antigenic regions in midkine molecule" Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1131-1139 (1994)

[文献書誌] Take,M.et al.: "Identification of nucleolin as a binding protein for midkine(MK)and heparin-binding growth-associated molecule(HB-GAM)" J.Biochem. 116. 1063-1068 (1994)

[文献書誌] Kojima,S.et al.: "Synthetic peptides derived from midkine enhances plasminogen activator in bovine aortic endothelial cells" Biochem.Biophys.Res Commun.206. 468-473 (1995)

[文献書誌] Yoshida,Y.et al.: "Midkine is present in the early stage cerebral infarct" Dev.Brain Res.(in press). (1995)

[文献書誌] Mitsiadis,T.A.et al: "Midkine(MK),a heparin-binding growth/differecntiation factor,is regulated by retinoic acid and epitheloal-mcsenchymal interactionsin the developing mouse tooth,and affects cell proliferation and morphogenesis" J.Cell Biol.(in press). (1995)

[文献書誌] Mitsiadis,T.A.et al: "Expression of the heparin-binding cytokines,midkine(MK)and-HB-GAM(pleiotrophin)is associated with epithelial-mesenchymal interactions during fetal development an organogenesis" Development. 121. 37-51 (1995)

1994 年度実績報告書

村松喬名古屋大学, 医学部, 教授 (00030891)