血小板凝集の調節作用を持つ生理活性タンパク質の構造一機能相関

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454646
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 千谷 晃一 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (60179942)
• 研究分担者: 藤村 吉博 奈良県立医科大学, 輸血部, 教授 (80118033) ; 林 宣宏 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (80267955) ; 松井 太衛 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (90183946)
• キーワード: 血小板凝集 / フォンビルブラント因子 / 血小板膜糖タンパク質(GP)Ib / ボトロセチン / ジャララカ GPIb-BP / アルボアグレギン-B / マムシギン / ビチスセチン

研究概要

血小板膜GPIb結合タンパク質の精製と性質: GPIbと結合し、フォンビルブラント因子(vWF)とGPIbとの結合を阻害する蛇毒タンパク質を精製し、それらの作用と部分構造を比較した。ジャララカGPIb-BPと既に単離されているアルボアグレギン-Bはタンパク質化学的手法で、マムシギンはcDNAクローニング法で、全アミノ酸配列を決定したところ、いずれも作用の異なるボトロセチンと高度の相同性を示した(Thromb.Haemost.(1996)76,633-639(総説)など)。又ジャララカGPIb-BPのα,β鎖を還元後分離したところ、そのβ鎖に活性が認められた(J.Biol.Chem.(1996)271,10635-10639)。マムシギンのcDNAクローニングでは数種のクローンが単離され、その多型性を示した。
ビチスセチンの精製と性質: Bitis arietans蛇毒からボトロセチン様活性を持つタンパク質を精製したところ、等電点9.1の塩基性タンパク質でボトロセチンとかなり性質の異なることが判明した(Biochem.Biophys.Res.Commun.226,273-279(1996))。ボトロセチンとの相同性は46%と近く、vWFに対する作用機序が異なる可能性がある(Res.Commun.Cell Mol.Biol.(1997)in press)。
vWFと細胞外マトリックス成分との結合: vWFと数種のマトリックス構成タンパク質との結合をELISA系で調べたところ、III型コラーゲンのみが特異的に結合することが判明した。しかし、静的状態ではその結合によりvWFとGPIbの細胞外ドメインに相当するグリコカリシンとの結合は惹起されなかった(J.Biochem.(1997)121,376-381)。

研究成果

• [文献書誌] Usami, Y., et al.: "Primary Structure of Alboaggregin-B Purified from the Venom of Trimeresurus albolabris." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 727-733 (1996)
• [文献書誌] Kawasaki, t., et al.: "Complete Amino Acid Sequence and Identification of the Platelet GPIb Binding Site of Jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Protein Isolated from Bothrops jararaca." J. Biol. Chem.271. 10635-10639 (1996)
• [文献書誌] Fujimura, Y., et al: "Snake Venom Proteins Modulating Interaction Between von Willebrand Factor and Platelet Glycoprotein Ib(Review)." Thromb. Haemost.76. 633-639 (1996)
• [文献書誌] Hamako. J., et al.: "Purification, and Characterization of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein from Bitis aritans Snake Venom." Biochem. Biophys. Res. Commun.226. 273-279 (1996)
• [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Interaction of von Willebrand Factor with the Extracellular Matrix and Glycocalicin under Static Conditions." J. Biochem.121. 376-381 (1997)
• [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein, Purified from Snake Venom of Bitis arietans." Res. Commun. Cell Mol. Biol.(in press). (1997)