研究課題/領域番号 |
06454661
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研究機関 | 埼玉大学 |
研究代表者 |
西垣 功一 埼玉大学, 工学部, 助教授 (10107378)
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研究分担者 |
鈴木 美穂 埼玉大学, 工学部, 助手 (60222064)
末光 隆志 埼玉大学, 理学部, 助教授 (40092019)
伏見 譲 埼玉大学, 工学部, 教授 (80011641)
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キーワード | ROSOR法 / ランダムPCR / テトラマ-ライブラリー / 酵素的ブロック合成 / ヒトゲノム計画 / 塩基配列決定 / PCRリレー / 配列平面表示法 |
研究概要 |
本研究最終年度(2年目)としては、重要な4部門において、次のような成果があった。 1.迅速オリゴ合成 迅速オリゴヌクレオチド合成法の改良によって、ヒトゲノムに対するPCRに用いることのできる19残基長のものができるようになった。純度や収率の問題を解決するために、半固相法(反応時は溶液状態で、洗浄時は固相のビーズに結合しているもの)の導入を行ない、基本的に成功した。 2.ランダムPCR 種々なゲノムDNAを調整し、いろいろなプライマーの組み合わせにおいて、100種以上のランダムPCRを行い、いずれにおいてもほぼ予測どおりの結果が得られたことをゲノムプロフィリング技術によって確認した。またランダムPCR産物の塩基配列決定に伴う困難(単一プライマー法では両端が同一の配列となり、一旦クローニングする必要があった)を解消する方法「二重プライマー法」を開発し、それを用い迅速多量にランダムPCR産物の配列決定ができる可能性が開けたため、ROSOR法自体を改善する方法論(ランダムPCRベース高速ROSOR法)の提案に結びついた。 3.PCRリレー法の実証 大腸菌ゲノム(470万塩基対)を用い、部分分解産物のライブラリーを形成し、既読領域と未読領域(カセット配列)に対するプライマーを作成しPCRし、産物の塩基配列決定を行い、新たに生じた既読領域を基に次段のPCRを行う。これをモデル領域に関して適用しPCRリレーが成立することを確かめた。 4.巨大ゲノム塩基配列解析関連技術の開発(1)多重並列的にPCRすることのできるマイクロPCR反応装置(直径9cmのシャーレに1000以上の穴)をポリアクリルアミドで試作することに成功した。(2)配列平面表示法を開発し、塩基配列情報やアミノ酸配列情報を容易に解析できるようにした。
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