基本転写因子TFIIAのコアクチベータ-としての機能

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06454669
• 研究機関: 東京工業大学
• 研究代表者: 半田 宏 東京工業大学, 生命理工学部, 教授 (80107432)
• キーワード: 基本転写因子 / TFIIA / アクチベータ- / コアクチベータ- / 抗TFIIA抗体 / 相互作用 / ゲノムDNA / マッピング

研究概要

(1)基本転写因子TFIIAの機能および発現調節を検討するために、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)と融合した組換えGST-TFIIAタンパク質を大腸菌で多量に発現させて、それをグルタチオン・アフィニティーカラムで精製した。この組換え融合タンパク質を用いて、TFIIAに対するポリク-ロナルおよびモノクローナル抗体を作製した。
(2)in vitro転写系を用いて、アクチベータ-の一つであるVP16の転写活性化に対する抗TFIIA抗体の効果を検討し、TFIIAがコアクチベータ-としの機能を有することを明らかにした。
(3)VP16以外のいくつかのアクチベータ-へのTFIIAの効果をin vitro転写系で検討するために、それらアクチベータ-により活性化を制御される鋳型DNAを作製すると共にアクチベータ-の組換え体を調整した。
(4)37kDaTFIIAのゲノミック遺伝子の染色体上でのマッピングをin situハイブリダイゼーションで現在、検討している。

研究成果

• [文献書誌] Yoshiyuki Inomata: "Preparation of DNA-carrying affinity latex and purification of transcription factors with the latex." J. Biomater. Sci. Polymer Edn.5. 293-302 (1994)
• [文献書誌] Yoshitetsu Sumi: "Application of cationic latex particles for protein separation" Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2. 419-427 (1994)
• [文献書誌] Jun-ichi Sawada: "Transcriptional activation through the tetrameric complex formation of E4TF1 subunits" EMBO J.13. 1396-1402 (1994)
• [文献書誌] Ericka Savoysky: "The retinoblastoma binding factor (RBF-1) site in RB gene promoter binds preferentially E4TF1, a member of the Ets transcription factor family." Oncogene. 9. 1839-1846 (1994)
• [文献書誌] Jun-ichi Sawada: "Regional mapping of two subunits of transcription factor E4TF1 to human chromosome" Jpn. J. Can. Res.86. 10-12 (1995)
• [文献書誌] 小池 克郎: "分子生物学プロトコール" 南江堂, 384 (1994)
• [文献書誌] Peter K. Vogt: "Methods in Enzymology Vol.254" Academic Press (in press), (1995)