| 研究課題/領域番号 |
06454678
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
姫野 勝 九州大学, 薬学部, 教授 (50037602)
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| 研究分担者 |
石川 豊子 九州大学, 薬学部, 助手 (50201314)
田中 嘉孝 九州大学, 薬学部, 助手 (20217095)
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| キーワード | リソソーム / エンドソーム / ソーティング・シグナル |
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| 研究概要 |
リソソーム膜蛋白質のリソソームへの局在化機構に関する研究は、リソソーム膜の主たる構成成分であるlgp-Aグループに属す蛋白質を中心に行われ、その細胞質領域に含まれるGly-Tyr配列(GY-motif)がリソソーム局在化に必要かつ十分なシグナルであることが報告されている。今回は、lgp-Bグループに属するラット肝リソソーム膜の主要構成成分の一つであるLGP96についてリソソーム局在化シグナルの詳細な検討を行った。10個のアミノ酸から成る細胞質領域(-KRHHTGYEQF)に様々な変異を導入したLGP96のcDNAをCOS細胞に一過性に発現させその細胞内分布を共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。その結果、1)C末端から8アミノ酸を欠失させた変異体は大部分が細胞膜に存在した。2)GY-motifのG→A変異体は野生型と同様のリソソーム様の分布を示したが、Y→A変異体は細胞膜に分布した。3)さらに、C末端のF→AおよびF→T変異体は一部細胞内にも存在するもののかなりの量が細胞膜に分布した。これらの結果より、LGP96がリソソーム様顆粒に局在化するためにはその細胞質領域のGY-motifに加え、C末端のFも効率良い局在化に必要であることが明らかとなった。次にリソソーム様顆粒の正体を明らかにする目的で、Percoll密度勾配遠心法による細胞分画を行ったところ、その大部分がリソソーム画分ではなく、より密度の小さなエンドソーム画分に存在することが明らかとなった。また電子顕微鏡でもこのことを確認した。以上の結果より、リソソーム膜蛋白質LGP96は、後期エンドソームがリソソームへ変換する際に起こるエンドソーム間、あるいはエンドソーム-リソソーム間の融合に必要な蛋白質として関与している可能性が示唆された。
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