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1996 年度 研究成果報告書概要

アポトーシスの分子機構と機能

研究課題

研究課題/領域番号 06454679
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 細胞生物学
研究機関東京理科大学

研究代表者

田沼 靖一  東京理科大学, 薬学部, 教授 (10142449)

研究分担者 塩川 大介  東京理科大学, 薬学部, 助手 (90277278)
研究期間 (年度) 1994 – 1996
キーワードアポトーシス / DNA断片化 / 細胞縮小 / エンドヌクレアーゼ / 細胞死 / ネクローシス
研究概要

アポトーシス・エンドヌクレアーゼ、DNaseγの酵素学的解析を行うためにリコンビナントDNaseγを作製し、その性状について詳細に検討した。
リコンビナントヒトDNaseγは、pET32a(+)発現ベクターを用い、大腸菌にてthioredoxin(Trx)との融合タンパク質(Trx-hDNaseγ)として作製した。ヒトDNaseγはそのcDNAの解析よりアミノ末端に20アミノ酸よりなるプリカーサーペプチドを持つタンパクとして生成されることが明らかとなっている。そこでまず、精製タンパクより決定されたアミノ末端からはじまるリコンビナントDNaseγ(Mature form)の作製を行った。その活性についてアクティビティーゲル法及びHeLaアッセイ法を用いて検討したところ、Ca2+/Mg2+存在下にDNAエンドヌクレアーゼ活性を示すことが分かった。次に、その性状検討を行ったところ、リコンビナントDNaseγはCa2+/Mg2+もしくはMn2+依存性のエンドヌクレーゼで、Zn2+,Cu2+,Ni2+,Co2+といった金属イオンや、ATA,クエン酸ナトリウムにより阻害されることがわかった。これらの結果はラット胸腺及び脾臓から精製されたDNaseγを用いて得られた結果と完全に一致した。以上のことから、クローニングされた遺伝子が真にDNaseγタンパク質をコードしていることが証明された。また、DNaseγはリン酸化やポリ(ADP-リボシル)化などの翻訳後修飾なく活性を持つことが示された。

  • 研究成果

    (19件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (19件)

  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Molecular mechanisms of apoptosis." Apoptosis in Nomal Development and Cancer (ed.by Mels Sluyser),Taylor & Francis. 39-59 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Inhibitory effect of tannic acid on human immunodeficiency virus promoter activity induced by 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate in Jurkat T-cells." Biochem.Biophys.Res.220. 411-417 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "DNA fragmentation during thymic apoptosis is catalyzed by DNaseγ." Apoptosis. 1. 147-152 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Properties of poly (ADP-ribose) glycohydrolase purified from pig testis nuclei." Arch.Biochem.Biophys.336. 139-146 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Replication factor Crecognizes 5'-phosphate ends of telomeres." Biochem.Biophys.Res.Commun.229. 310-315 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sei-ichi Tanuma: "Restrictive proteolysis of fodrin to 120 kDa fragment is not catalyzed by calpain during thymic apoptosis." Apoptosis. 2. 1-7 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシスとは何か-死からはじまる生の科学-" 講談社, 239 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 田沼靖一: "アポトーシスと創薬" ファルマシア, 140 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] A.Nishikawa, D.Shiokawa, K.Umemori, H.Hayashi, and S.Tanuma: "Occurence of DNase gamma-like apoptptotic endonucleases in hematopoietic cells in Xenopus Laevis and their relation to metamorphosis" Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] D.Shiokawa, H.Ohyama, T.Yamada, and S.Tanuma: "Purification and properties of DNase gamma from apoptotic rat thymocytes" Biochem.(in press). (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Z.Kouchi, T.C.Saido, H.Ohyama, K.Suzuki, and S.Tanuma: "Restrictive proteolysis of fodrin to 120kDa fragment is not catalyzed by calpain during thymic apoptosis" Apoptosis. 2. 1-7 (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] F.Uchiumi, T.Ohta, and S.Tanuma: "Replication factor C recognizes 5'-phosphate ends of telomeres" Biochem.Biophys.Res.Commun.229. 310-315 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] H.Abe, and S.Tanuma: "Properties of poly (ADP-ribose) glycohydrolase purified from pig testis nuclei" Arch.Biochem.Biophys.336. 139-146 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] D.Shiokawa, K.Nishimura, H.Maruta, and S.Tanuma: "DNA fragmentation during thymic apoptosis is catalyzed by DNase gamma" Apoptosis. 1. 147-152 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] F.Uchiumi, H.Maruta, J.Inoue, T.Yamamoto, and S.Tanuma: "inhibitory effect of tannic acid on human immunodeficiency virus promoter activity induced by 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate in Jurkat T-cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.220. 411-417 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] S.Tanuma: "In Apoptosis in Normal Development and Cancer (ed.by Mels Sluyser), Taylor & Francis Ltd., London UK" Molecular mechanisms of apoptosis. 39-59 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] S.Tanuma: "DNA fragmentation in apoptosis" Tiss.Cul, Res.Commun.53. 1-9 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] S.Tanuma, and D.Shiokawa: "An endonuclease responsible for apoptosis" In Apoptosis : Prog.Mol.Subcell, Biol.Springer-Verlag. 1-12 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] K.Aoki, H.Maruta, F.Uchiumi, T.Hatano, T.Yoshida, and S.Tanuma: "A Macrocircular ellagitannin, oenothein B,supresses mouse mammary tumor gene expression via inhibition of poly (ADP-ribose) glycohydrolase" Biochem.Biophys.Res.Commun.210. 329-337 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 1999-03-09  

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