| 研究概要 |
我々は、胎生16日のラット脳からpoly(A)RNAを抽出してcDNA libraryを作製し、この中から胎生期の脳に比べて成熟期の脳での発現が著しく減少するmRNAに対するcDNAクローンを選択した。modified differential screening法(total cDNA probeをcDNA library DNAから調製する方法)によるスクリーニングと、引き続いて行ったNorthem blot解析により、胎生期の脳に選択的に発現するmRNAのcDNAクローンを全部で22種類単離することができた。塩基配列解析の結果、それらの中には9種の既知クローン(β tubulin M β5,αtubulin M α 1,thymosin β10,stathmin,βtubulin M β2,α-internexin,ferritin Lg subunit,neuronatin,amphoterin)と、13種の新規クローンが含まれていることが判明した。in situ hybridization法での解析では、これらのmRNAの発現は各クローンごとに様々のパターンを呈しながら脳発達に伴って減少していた。これらの中に、発達過程の小脳の外顆粒層やsubventricular zoneに選択性の強い発現を示すクローンが認められ、脳神経系の発生・分化過程の解析に有用な新しい分子マーカーとして利用できる可能が示された。
我々はさらに、少量の組織から発現量に差があるmRNAのcDNAクローンを単離するための方法についても検討を加えた。その結果、Northem blot解析法の代わりとしてcDNA library DNA-Southern blot解析法が多くのクローンについて有用であることを見いだした。modified differential screening法と併せて使用することにより、cDNA libraryを一度調製すればそれ以後組織からのRNAを必要とせずに解析ができることになる。これらの手法は、今後さらに脳の発達時期や部位を限って分化マーカーの解析を行う際に有用であると言える。
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