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1996 年度 研究成果報告書概要

圧力ジャンプNMR装置の開発

研究課題

研究課題/領域番号 06554026
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分試験
研究分野 物理化学
研究機関神戸大学

研究代表者

赤坂 一之  神戸大学, 理学部, 教授 (50025368)

研究分担者 山田 博昭  神戸大学, 理学部, 助教授 (90030767)
研究期間 (年度) 1994 – 1996
キーワード高圧 / NMR / 圧力ジャンプ / 蛋白質 / 変性 / 構造変化
研究概要

1)まずこれまで低分子を対象に用いられてきた熱膨張型高圧ガセル法を用いて、プロトン400MHzの高い感度で高圧NMR測定を可能にした。これをシステムを用いて、蛋白質の高圧変性について研究した。Ribonuclease Aの重水溶液を対象とし、1-2000気圧のさまざまな圧力下でプロトンNMRを用いて、天然-変性構造間の平衡定数を温度の関数として測定することに成功した。これを熱力学的関数に基づいて解析し、Ribonuclease Aの圧力変性が蛋白質の疎水基を取り巻く水の熱力学的状態に強く依存することを初めて明らかにした。
2)次に、NMRプローブ内の試料に対して外部から直接加圧できる、超高磁場用のオンライン(直結型)高圧NMR測定システムを製作し、これを750MHzNMR測定装置と直結して、超高感度超高分解能で高圧NMRスペクトルを測定できシステムを完成した。これはハンドポンプで圧力を操作し、灯油を媒体として直接NMRプローブ内に設置した試料セル(石英製)を加圧できるものである。これによって圧力変性とは別に、フォールドした立体構造そのものが加圧によって変化することを明らかにした。また軽水中での測定から、加圧によって蛋白質の水素結合が敏感に影響を受け、その距離が短縮されることを発見した。
4)最後に以上の経験を生かして、NMR用圧力ジャンプNMR装置を試作した。このシステムは、高圧ニードルバルブ、圧力ジャンプ用チェックバルブ、ストライカ-、メカニカルトリガー、高圧配管(いずれもSUS-316製)よりなる。圧力媒体にメタノールを使用して、2500気圧から常圧へ瞬間的に圧力をジャンプさせる実験に成功した。この装置に、合成石英製高圧セル(耐圧3000気圧以上)を接続し、プロパノールを対象として圧力ジャンプNMRの測定実験を行ったところ、ジャンプに伴うそれぞれのプロトンの共鳴線のシフトの観測に成功した。

  • 研究成果

    (9件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (9件)

  • [文献書誌] H. Yamada et al.: "High pressure high resolution NMR at very high magnetic field." International Conference on High Pressure Science and Technology. (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 赤坂一之他: "圧力ジャンプNMR装置の試作" 第35回NMR討論会要旨集. 35. 74-75 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 神村耕二他: "750MHzでの高圧NMRの実験-蛋白質構造変化の検出-" 第35回NMR討論会要旨集. 35. 175-178 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] T. Tezuka et al.: "Pressure-induced structural changes in lysozyme. 1H NMR study at 750MHz." 3rd Workshop ″Principles of Protein Architecuture″ Abstracts. 58 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] H. Yamada et al.: "NMR study of pressure effect on the hindered rotation in cis-1, 12-disubstituted [1,2] paracyclophanes." Chemistry Letters. 437-438 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 山田 博明他: "シス-1、13シスアセトキシ[13]パラシロクロファンの高圧NMR" 第35回NMR討論会要旨集. 35. 111-112 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yamaguchi et al.,: "High pressure NMR study on protein unfolding. Ribonucelase A" High Pressure Bioscience and Biotechnology (Hayashi, R. & Balny, C., eds. ) , Elsevier, (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] K. Akasaka et al.: "NMR approaches to the Heat-, Cold-, and Pressure-Induced Unfolding of Proteins" Biological NMR spectroscopy (John L. Markley & Stanley J. Opella, eds. ) Oxofred University Press, (1997)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yamaguchi, T., Yamada, H., and Akasaka, K.: J.Mol.Biol.250. 689-694 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 1999-03-09  

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