1996 年度実績報告書

酵母を用いる活性型Rasの抑圧変異のスクリーニング

研究課題

研究課題/領域番号	06557011
研究機関	東京工業大学
研究代表者	上代淑人東京工業大学, 生命理工学部, 寄附講座客員教授 (90012690)
研究分担者	小出寛東京工業大学, 生命理工学部, 寄附講座教員 (70260536) 佐藤孝哉東京工業大学, 生命理工学部, 寄附講座教員 (20251655)
キーワード	Ras / NF-1 / Raf / 細胞内シグナル伝達 / GTP結合タンパク質
研究概要	本年度は、HEK293細胞を用いた一過性発現系によって、NF-1GRDとRasタンパク質との相互作用についての詳細な解析を行った。Rasの下流分子としては、セリン・トレオニンキナーゼの1つであるRafが知られており、RafのGTP結合型Rasへの直接の結合も観察されている。さらにMEK、ERKからなるMAPキナーゼカスケードがその下流でRafによって調節されている。NF-1タンパク質は、Rasのエフェクター領域に結合することが知られてるが、RafもRasの同じ領域に結合する。昨年度までの研究より、GTP結合型Rasと結合し、共免疫沈降されるRafタンパク質をウェスタンブロット法により検出する系、あるいは共免疫沈降されるキナーゼ活性を定量する系において、野性型および変異型NF-1GRDの作用を検討したところ、変異型NF-1GRDは、野性型に比べて低濃度でRasとRafとの結合に対して阻害効果を示すことが明らかとなった。試験管内再構成係によって示された我々の変異型NF-1GRDによるRafタンパク質とRasタンパク質との相互作用の阻害は、細胞内では、活性変異型Rasによる、RafやMAPキナーゼの活性化の選択的阻害として観察された。これに対して内在性Rasを介する、レセプター刺激に応答したこれらの活性化は阻害を受けなかった。今後、Raf以外の細胞内でのターゲットとして知られている、RalGDS、PI3-Kなどの結合に対する阻害効果も検討したい。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Tomokazu Ohtsuka et al.: "Analysis of the T-cell activation signaling pathway mediated by Tyroine kinase proteinkinase C,and Ris protein,mhick is modulated by intracellular cyclic AMP." Biochim.Biophys,Acta. 1310. 223-232 (1996)
[文献書誌] Takaya Satoh et al.: "Tyroine phosghasylation of ACK in respnse to Tem perature shift-drwn,hyperosmotic shock,and epidermal growth factor stimulation" FEBS Lett.386. 230-342 (1996)
[文献書誌] Koji Terada et al.: "Ras-dependent activation of c-Jun N-teminal kinase/stress-activated protein kenase in response to interleukin-3 stimulation in ulct in hematopoietic BaF3 cells." J.Biol,Chem.272. 4544-4548 (1997)
[文献書誌] Mika Miyake et al.: "Unfanesylated tromsforming Ras mufant inhibits the Ras-segnaling pathwas by farming a stable Ras・Rat compley in the cytoral" FEBS Lett.378. 15-18 (1996)
[文献書誌] Edamatsu H.et al.: "Inclncible high-level expression vector for mammalian cells,PEF-LAC carrying human elong ation factor ld promoter and lac operator." Gene. (印刷中). (1997)
[文献書誌] Yamauchi,J.et al.: "C-terminal mintation of G protein β Rafunit affects differentially extro cellular signal-kinase and c-Tun N-teminal kinase pathways in HEK293 cells" J,Biol.Chem.272(印刷中). (1997)

1996 年度 実績報告書

酵母を用いる活性型Rasの抑圧変異のスクリーニング

研究代表者

上代 淑人 東京工業大学, 生命理工学部, 寄附講座客員教授 (90012690)

研究成果

[文献書誌] Tomokazu Ohtsuka et al.: "Analysis of the T-cell activation signaling pathway mediated by Tyroine kinase proteinkinase C,and Ris protein,mhick is modulated by intracellular cyclic AMP." Biochim.Biophys,Acta. 1310. 223-232 (1996)

[文献書誌] Takaya Satoh et al.: "Tyroine phosghasylation of ACK in respnse to Tem perature shift-drwn,hyperosmotic shock,and epidermal growth factor stimulation" FEBS Lett.386. 230-342 (1996)

[文献書誌] Koji Terada et al.: "Ras-dependent activation of c-Jun N-teminal kinase/stress-activated protein kenase in response to interleukin-3 stimulation in ulct in hematopoietic BaF3 cells." J.Biol,Chem.272. 4544-4548 (1997)

[文献書誌] Mika Miyake et al.: "Unfanesylated tromsforming Ras mufant inhibits the Ras-segnaling pathwas by farming a stable Ras・Rat compley in the cytoral" FEBS Lett.378. 15-18 (1996)

[文献書誌] Edamatsu H.et al.: "Inclncible high-level expression vector for mammalian cells,PEF-LAC carrying human elong ation factor ld promoter and lac operator." Gene. (印刷中). (1997)

[文献書誌] Yamauchi,J.et al.: "C-terminal mintation of G protein β Rafunit affects differentially extro cellular signal-kinase and c-Tun N-teminal kinase pathways in HEK293 cells" J,Biol.Chem.272(印刷中). (1997)

1996 年度実績報告書

上代淑人東京工業大学, 生命理工学部, 寄附講座客員教授 (90012690)