1995 年度実績報告書

下痢原因細菌の多種類の病原因子の同時迅速鑑別検出法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	06557019
研究機関	大阪大学
研究代表者	本田武司大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029808)
研究分担者	飯田哲也大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (90221746) 余明順大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482) 山本耕一郎大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (30158274)
キーワード	腸炎ビブリオ / 下痢 / 抗体 / ELISA / 迅速検出 / DNAプローブ
研究概要	下痢原因菌のうち今回は腸炎ビブリオの病原因子であるTDHとその免疫学的類似毒素(TRH)の簡易迅速検出法の開発を試みた。高分子化合物(たとえばナイロン)表面に抗体をPolyethyrene imineとMaleic anhydride methylvinyl ether copolymerとを用いて化学結合させる方法を前年度に確立したので、これを用いて、TDHとTDHを迅速にしかも簡単に鑑別検出するシステムを開発した。この系は、ELISA法を基礎とするものであるが、抗体を化学結合で固定したため、反応物が支持体から遊離するなどで感度が低下するのを避けることができ、反応時間を15分に短縮(普通1時間)出来、しかも感度が上がったため、肉眼で結果を判定できるようになった。また、1つのホールダーに複数の抗体(今回はTDH、TDH,及びTDH/TRHに特異的に反応するモノクローナル抗体を用いた)を結合させたスリップを用意したので、1度の検査で、TDHとTRHの同時鑑別検出が可能となった。試験的に本検出キットを作成し,分離菌102株について本法を応用したところ、DNAプローブ法で得られた結果と良く一致した。さらに下痢患者便60検体につき、下痢便中のTDH/TRHの直接鑑別検出を試みたところ、感度88、9%特異性92、0%で良好な結果であった。これらの結果から本研究で開発した技術は、他の毒素の迅速な鑑別検出法としても応用できるものと思われ、現在CTやLTの検出に応用中である。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Yoh,M.,et al.: "Evaluation of two assay kits for thermostabls direct hemolysin as an indicator of TDH-related hemolysin produced.by..V.parahaemolyticus" Microbiol.Immunol.39(2). 157-159 (1995)
[文献書誌] Nagayama,k.,et al.: "Characteruzation of.a.haemolysin related to Vp-TDH produced by a kanagawa phenomenon-negative clinical isolate of V.parahaemolyticus" J.Med.Microbiol.42. 83-90 (1995)
[文献書誌] Honda,T.,et al.: "A novel method to chemically immobilize.antibody on nylon and its application to the rapid and differential detection linked immuno-" Clin.Diag.Lab.Immun.2(2). 177-181 (1995)
[文献書誌] Matsuyama,J.,et al.: "Monoclonal antibody developed against a hemolysin of Bacillus thuringiensis." Micobiol.Immunol.39(8). 619-622 (1995)
[文献書誌] Yamamoto,k.,et al.: "Amino acid sequence of the cholera toxin from Vibrio cholerae 0137 strain S7 which differ from those of strain 01." Gene. 163. 155-156 (1995)
[文献書誌] Sakaue,Y.et al.: "An imported cholera case infected with both 0139 synonym Benfal and 01 Vibrio cholerae in Japan." Eur.J.Epidemiol.11. 1-2 (1995)
[文献書誌] 本田武司: "菌体外蛋白毒素の検出法" 日本臨床, 3 (1995)
[文献書誌] 本田武司: "腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒および類似毒素の検査" 臨床検査ガイド'95, 2 (1995)

1995 年度 実績報告書

下痢原因細菌の多種類の病原因子の同時迅速鑑別検出法の開発

研究代表者

本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029808)

研究成果

[文献書誌] Yoh,M.,et al.: "Evaluation of two assay kits for thermostabls direct hemolysin as an indicator of TDH-related hemolysin produced.by..V.parahaemolyticus" Microbiol.Immunol.39(2). 157-159 (1995)

[文献書誌] Nagayama,k.,et al.: "Characteruzation of.a.haemolysin related to Vp-TDH produced by a kanagawa phenomenon-negative clinical isolate of V.parahaemolyticus" J.Med.Microbiol.42. 83-90 (1995)

[文献書誌] Honda,T.,et al.: "A novel method to chemically immobilize.antibody on nylon and its application to the rapid and differential detection linked immuno-" Clin.Diag.Lab.Immun.2(2). 177-181 (1995)

[文献書誌] Matsuyama,J.,et al.: "Monoclonal antibody developed against a hemolysin of Bacillus thuringiensis." Micobiol.Immunol.39(8). 619-622 (1995)

[文献書誌] Yamamoto,k.,et al.: "Amino acid sequence of the cholera toxin from Vibrio cholerae 0137 strain S7 which differ from those of strain 01." Gene. 163. 155-156 (1995)

[文献書誌] Sakaue,Y.et al.: "An imported cholera case infected with both 0139 synonym Benfal and 01 Vibrio cholerae in Japan." Eur.J.Epidemiol.11. 1-2 (1995)

[文献書誌] 本田 武司: "菌体外蛋白毒素の検出法" 日本臨床, 3 (1995)

[文献書誌] 本田 武司: "腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒および類似毒素の検査" 臨床検査ガイド'95, 2 (1995)

1995 年度実績報告書

本田武司大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029808)

[文献書誌] 本田武司: "菌体外蛋白毒素の検出法" 日本臨床, 3 (1995)

[文献書誌] 本田武司: "腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒および類似毒素の検査" 臨床検査ガイド'95, 2 (1995)