1996 年度実績報告書

ヒトにおける薬物代謝を予測する新規代替試験法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	06557124
研究機関	北海道大学
研究代表者	鎌滝哲也北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177)
研究分担者	中山佳都夫北海道大学, 薬学部, 助手 (20261323) 横井毅北海道大学, 薬学部, 助教授 (70135226)
キーワード	代替法 / P450 / トランスジェニックマウス / CYP3A7 / p53欠損マウス / 細胞発現系 / 肝細胞
研究概要	1.ヒト胎児の主要なP450であるCYP3A7のcDNAを導入したトランスジェニック(Tg)マウスにCYP3A7の基質(薬物)を投与し、その代謝物の血中濃度を測定することにより代替法としての有用性を検討した。すなわち、Tgマウスにミダゾラムを投与し、血清中のミダゾラムの代謝物レベルをHPLCで測定した。その結果、野性型マウスと比べ、ミダゾラムの1′-位水酸化代謝物のレベルは有意に高かった。 2.現在までにP450を安定に発見する培養肝細胞株は得られていない。p53欠損マウスのいくつかの臓器の細胞は形態を維持した状態で長期培養可能であることから、肝細胞についてP450を安定に発現する細胞株の樹立を試みた。すなわち、CYP3A7を導入したTgマウスとp53欠損マウスを交配し、その肝細胞から培養細胞株を樹立した。このTgマウスはマウスメタロチオネインプロモータの制御下でCYP3A7を発現するため、亜鉛による誘導的発現が可能である。樹立した培養肝細胞において培地に塩化亜鉛を添加することによりCYP3A7mRNAが発現することをノーザンブロット分析で明らかにした。また、CYP3A7の酵素活性を7-プロポキシクマリンを基質として測定したところ、塩化亜鉛を添加したときのみ活性が認められた。これらのことより、CYP3A7を安定に発現する肝細胞株が樹立できたことが示された。この方法を応用すれば、ヒト酵素導入Tgマウスとp53欠損マウスを交配するだけで、目的のヒト酵素を発現する培養細胞株を得ることができ、非常に有用であると考えられる。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Y.Li et al.: "Establishment of transgenic mice carrying human fetus-specific CYP3A7" Arch.Biochem.Biophys.329. 235-240 (1996)
[文献書誌] T.Yokoi et al.: "A new CYP2D6 allele with a nine base insertion in exon 9 in a Japanese population associated with poor metabolizer phenotype." Pharmacogenetics. 6. 395-401 (1996)
[文献書誌] K.Nakamura et al.: "CYP2D6 is a proncipal cytochrome P450 responsible for metabolism of the histamine H1 antagonist promethazine in human liver microsomes." Pharmacogenetics. 6. 449-457 (1996)
[文献書誌] Y.Li et al.: "Perinatal expression and inducibility of human CYP3A7 in C57BL/6N transgenic mice." Biochem.Biophys.Res.Commun.228. 312-317 (1996)
[文献書誌] Y.Takahashi et al.: "Expression of aryl hydrocarbon receptor (AhR) and Ah receptor nuclear translocator (Amt) in adult rabbits known to be non-responsive to cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) inducers." Eur.J.Biochem.242. 512-518 (1996)
[文献書誌] Y.Li et al.: "In vivo activation of aflatoxin B_1 in C57BL/6N mice carrying a human fetus-specific CYP3A7 gene." Cancer Res.57. 641-645 (1996)
[文献書誌] 鎌滝哲也他: "薬物代謝の影響:塩酸イリノテカンの副作用を例として"バイオアベイラビリティーの改善を目指して"" 現代医療社(印刷中), (1996)

1996 年度 実績報告書

ヒトにおける薬物代謝を予測する新規代替試験法の開発

研究代表者

鎌滝 哲也 北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177)

研究成果

[文献書誌] Y.Li et al.: "Establishment of transgenic mice carrying human fetus-specific CYP3A7" Arch.Biochem.Biophys.329. 235-240 (1996)

[文献書誌] T.Yokoi et al.: "A new CYP2D6 allele with a nine base insertion in exon 9 in a Japanese population associated with poor metabolizer phenotype." Pharmacogenetics. 6. 395-401 (1996)

[文献書誌] K.Nakamura et al.: "CYP2D6 is a proncipal cytochrome P450 responsible for metabolism of the histamine H1 antagonist promethazine in human liver microsomes." Pharmacogenetics. 6. 449-457 (1996)

[文献書誌] Y.Li et al.: "Perinatal expression and inducibility of human CYP3A7 in C57BL/6N transgenic mice." Biochem.Biophys.Res.Commun.228. 312-317 (1996)

[文献書誌] Y.Takahashi et al.: "Expression of aryl hydrocarbon receptor (AhR) and Ah receptor nuclear translocator (Amt) in adult rabbits known to be non-responsive to cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) inducers." Eur.J.Biochem.242. 512-518 (1996)

[文献書誌] Y.Li et al.: "In vivo activation of aflatoxin B_1 in C57BL/6N mice carrying a human fetus-specific CYP3A7 gene." Cancer Res.57. 641-645 (1996)

[文献書誌] 鎌滝哲也 他: "薬物代謝の影響:塩酸イリノテカンの副作用を例として"バイオアベイラビリティーの改善を目指して"" 現代医療社(印刷中), (1996)

1996 年度実績報告書

鎌滝哲也北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177)

[文献書誌] 鎌滝哲也他: "薬物代謝の影響:塩酸イリノテカンの副作用を例として"バイオアベイラビリティーの改善を目指して"" 現代医療社(印刷中), (1996)