1994 年度実績報告書

新規細胞内情報伝達物質「環状ADPリボース」の定量法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	06557129
研究機関	東京大学
研究代表者	堅田利明東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)
研究分担者	多田周右東京大学, 薬学部, 助手 (00216970) 星野真一東京大学, 薬学部, 助手 (40219168) 櫨木修東京大学, 薬学部, 助手 (80142751) 榎本武美東京大学, 薬学部, 助教授 (80107383)
キーワード	ADPリボース環化酵素 / 環状ADPリボース / ヒトリンパ球表面抗原CD38 / NAD / カルシウムイオン / 情報伝達
研究概要	我々の研究グループは、NADを基質とした細菌毒素の触媒するADPリボシル化反応を利用して、G蛋白質の研究を行ってきたが、レチノイン酸によるHL-60細胞の好中球への分化に伴ってNADの分解酸素が誘導され、この分解活性がヒトリンパ球表面抗原のCD38分子によることを明らかにした。CD38分子はアメフラシの卵精巣より単離されたcyclic ADP-riboseの合成酵素(ADP-ribosyl cyclase)と構造上酷似し、さらに代謝産物であるcyclic ADP-riboseは、IP_3と同様にある細胞内プールからCa^<2+>を放出させる作用をもつことから、この新規環状ヌクレオチドは細胞内で新たなsecond messengerとして機能することが期待された。本年度においては、cyclic ADP-riboseの合成と分解に関わる基礎的な研究の展開と、second messengerとしての生理的役割を立証する一つの手段として、cyclic ADP-ribose量を高感度に測定する方法の開発を目的とし、以下の点を明かにした。1)アメフラシより精製した環状ADP-リボース合成酵素は、環状ADP-リボースとニコチンアミドから効率よくNADを生成(逆反応が進行)し得る“lyase"の特性を有し、構造上類似性が指摘されていたCD38分子の触媒するNADglycohydrolaseとは酵素学的に別種のファミリーに属することが示された。2)cyclic ADP-riboseのスクシニル化誘導体をウシ血清アルブミンと結合させ、それを抗原としてウサギに免役した結果、cyclic ADP-riboseを特異的に認識する多クローン性抗体が得られた。[^<32>P]cyclic ADP-riboseと得られた抗体を利用して、pmolオーダーのcyclic ADP-riboseを定量し得るラジオイムノアッセイ系を開発した。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Hiroshi Nishina,et al.: "Cell surface antigen CD38 identified as ecto-enzyme of NAD glycohydrolase has hyaluronate-binding activity." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1318-1323 (1994)
[文献書誌] Tomohiko Maehama,et al.: "Characterization of butulinum C3-catalyzed ADP-ribosylation of rho proteins and identification of mammalian C3-like ADP-ribosyltransferase." Mol.Cell.Biol.138. 135-140 (1994)
[文献書誌] Jun-ichi Kawabe,et al.: "Differential activation of adenylyl cyclase by protein kinase C isoenzymes." J.Biol.Chem.269. 16554-16558 (1994)
[文献書誌] Tomohiko Maehama,et al.: "ADP-ribosylarginine glycohydrolase catalyzing the release of ADP-ribose from the cholera toxin-modified α-subunits of GTP-binding proteins." J.Biochem.116. 1134-1138 (1994)
[文献書誌] Kiyoshi Inageda,et al.: "Enzyme property of Aplysia ADP-ribosyl cyclase:Comparison with NAD glycohydrolase of CD38 antigen." J.Biochem.117. 125-131 (1995)
[文献書誌] Yoshiharu Ohoka,et al.: "Involvement of pertussis toxin-sensitive mechanism in retinoic acid-induced differentiation of human leukemic HL-60 cells." J.Biochem.117. 190-196 (1995)
[文献書誌] Toshiaki Katada,et al.: "Heterotrimeric G proteins(Methods in Enzymology,Vol.237)" Academic Press,Inc., 561 (1994)
[文献書誌] 金保安則、堅田利明: "GTP結合蛋白質(宇井理生編)" メジカルレビュー社, 207 (1994)

1994 年度 実績報告書

新規細胞内情報伝達物質「環状ADPリボース」の定量法の開発

研究代表者

堅田 利明 東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)

研究成果

[文献書誌] Hiroshi Nishina,et al.: "Cell surface antigen CD38 identified as ecto-enzyme of NAD glycohydrolase has hyaluronate-binding activity." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1318-1323 (1994)

[文献書誌] Tomohiko Maehama,et al.: "Characterization of butulinum C3-catalyzed ADP-ribosylation of rho proteins and identification of mammalian C3-like ADP-ribosyltransferase." Mol.Cell.Biol.138. 135-140 (1994)

[文献書誌] Jun-ichi Kawabe,et al.: "Differential activation of adenylyl cyclase by protein kinase C isoenzymes." J.Biol.Chem.269. 16554-16558 (1994)

[文献書誌] Tomohiko Maehama,et al.: "ADP-ribosylarginine glycohydrolase catalyzing the release of ADP-ribose from the cholera toxin-modified α-subunits of GTP-binding proteins." J.Biochem.116. 1134-1138 (1994)

[文献書誌] Kiyoshi Inageda,et al.: "Enzyme property of Aplysia ADP-ribosyl cyclase:Comparison with NAD glycohydrolase of CD38 antigen." J.Biochem.117. 125-131 (1995)

[文献書誌] Yoshiharu Ohoka,et al.: "Involvement of pertussis toxin-sensitive mechanism in retinoic acid-induced differentiation of human leukemic HL-60 cells." J.Biochem.117. 190-196 (1995)

[文献書誌] Toshiaki Katada,et al.: "Heterotrimeric G proteins(Methods in Enzymology,Vol.237)" Academic Press,Inc., 561 (1994)

[文献書誌] 金保安則、堅田利明: "GTP結合蛋白質(宇井理生 編)" メジカルレビュー社, 207 (1994)

1994 年度実績報告書

堅田利明東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)

[文献書誌] 金保安則、堅田利明: "GTP結合蛋白質(宇井理生編)" メジカルレビュー社, 207 (1994)