新規細胞内情報伝達系遮断薬の開発に関する基礎的研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06558095
• 研究機関: (財)東京都老人総合研究所
• 研究代表者: 本間 好 (財)東京都老人総合研究所, 生体情報部門, 研究員 (60192324)
• 研究分担者: 山崎 基生 協和発酵工業株式会社, 東京研究所, 主任研究員 ; 本間 美和子 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (40192538) ; 大海 忍 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (20160046)
• キーワード: 細胞内情報伝達 / イノシトール リン脂質 / ホスホリパーゼC / オートインヒビター / 合成ペプチド / ミリスチン酸化

研究概要

ガンマ型PLC(PLC‐γ)の分子内にPLC活性を非拮抗的かつ強力に阻害する一次構造(PLC活性阻害[PCI]領域)が存在することを見い出し、アミノ酸配列Tyr‐Arg‐Lys‐Met‐Arg‐Leu‐Arg‐Tyr(YRKMRLRT)がPLC活性阻害に必須であることや、この配列を含む合成ペプチド(PCIペプチド)が細胞膜に存在するPLCをも抑制すること等を明らかにした。これらの結果は、本PLC活性阻害ペプチド及び構造類似体が、イノシトールリン脂質情報伝達系を特異的に抑制するPLC阻害剤として応用できる可能性を示唆している。そこで本研究では、PLC活性阻害ペプチドおよびペプチドにアミノ基やアシル基を導入し、細胞外に添加するだけで細胞内部に導入できるような細胞膜透過性のPLC阻害剤を作製することを試みた。
現在までにPCIペプチド修飾体として約40種の新しいペプチド誘導体を合成したが、これまでに次に示す新しい成果が得られている。1)PCIペプチドは、ある特定の立体構造をとるが、ペプチドのN末端のアシル化によってはこの構造は変化しないこと、2)N末端のアシル化によりPCIペプチドのin vitroでのPLC活性抑制作用は著しく強化されること、3)N末端の修飾により細胞膜透過性が著しく亢進し細胞レベルでPLC活性化を抑制すること、4)N末端をミリスチン酸化したmyr‐PCIはPDGF、FGF、ボンベシン等のリガンド刺激によるPLC活性化(IP_3産生)をED_<50>=1μMで抑制すること、5)PCIペプチドのC末端を修飾することにより、更に強力な細胞膜透過性のPCIペプチドの作製が可能であること、である。

研究成果

• [文献書誌] Homma,M.K.,et al.: "Enhanced phosphoinositide metabolism in colorectal carcinoma cells derived from familial adenomatous polyposis patients." J.Cell.Biochem.55. 477-485 (1994)
• [文献書誌] Takata,M.,et al.: "Tyrosine kinase Lyn and Syk regulate the B cell‐coupled Ca2+ mobilization through the distinct pathway." EMBO J.13. 1341-1349 (1994)
• [文献書誌] Asano,M.et al.: "Purification and characterization of nuclear phospholipase C specific for phosphoinositides." J.Biol.Chem.269. 12360-12366 (1994)
• [文献書誌] Emori,Y.,et al.: "Drosophila phospholipase C‐γ expressed predominantly in blastodermal cells duringlater embryonic stages." J.Biol.Chem.269. 19474-19479 (1994)
• [文献書誌] Homma,Y.,et al.: "Evidence for the accumulation of oxdative stress during cellular ageing of human diploid fibroblasts." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1063-1069 (1994)
• [文献書誌] Homma,Y.,&Emori,Y.: "A dual signal mediator showing RhoGAP and phospholipase C‐δ stimulating activities." EMBO J.14. 286-291 (1995)