| 研究概要 |
前年度に引き続き,18S-5. 8S-26S rDNA塩基配列部位を分析するpTa71プローブを使った蛍光インシチュ・ハイブリダイゼーションを日本産広義キク属四倍体種のシマカンギク,ナカガワノギクおよび中国産D. chanetii体細胞中期染色体に行い,仁形成部位とシグナル部位が相関していることをつきとめ,それがシマカンギクとD. chanetiiで共通して8個,ナカガワノギクで10個観察された.これらの染色体上の位置と数は種特異的で,種ごとに安定しているので,種間関係,雑種化などが分析でき,細胞分類学に形質として使えることが分かった。間期核や体細胞分裂前期染色体でも,中期染色体でみられたものとほぼ同数であったが,はっきりと確認できなかった。また,広島県因島から大三島にかけてと山口県徳山市方面のアブラギク,セトノジギク,リュウノウギクの個体を多数採集し,本施設で栽培するとともに,同じ蛍光インシチュ・ハイブリダイゼーションをおこなって,シグナル数の変異性を調べ,移入交雑の存在を明らかにした。
一方,ホソバノセイタカギク(ミコシギク)とハマギク(両種とも2n=18,二倍体)及び両種のF_1雑種を作出して材料とし蛍光インシチュ・ハイブリダイゼーションを行った。ホソバノセイタカギクの体細胞中期染色体の付随体部位で6個のシグナルが確認されたが,その内の4個は強くて大きい蛍光を示した.同様にCMA蛍光染色で付随体部分が4個のものと6個のものが観察されたが,この現象は数の変異性ではなく,付随体のGC塩基配列のコピー数の差であることが強く示唆された。ハマギク体細胞中期染色体では2個,F_1雑種では4個のハイブリダイゼーションシグナルがいずれも付随体部位で観察された。さらに,ホソバノセイタカギクの全ゲノムをプローブとしてF_1雑種の体細胞中期染色体にハイブリダイズ(GISH)したところ,二様相核型のうち,ホソバノセイタカギクに由来する長い染色体のみ蛍光を発し,特に各染色体の両腕端部は強い蛍光を発した。ハマギク由来の短い染色体は,対比染色のプロピデューム・アイオダイドの赤色を呈した。ブロッキングDNAの有無は結果に関係なかった。また,ハマギクの全ゲノムをプローブとして,同様のハイブリダイズしたところ,正反対の,まったく同じ結果を得た。雑種の減数分裂染色体にもGISHを行い,両種由来のいくつかの染色体で二価対合がみられ,また,転座も確認できた。
|
