| 研究概要 |
報告者は、すでに遺伝子操作系の確立された植物RNAウイルスであるブロモウイルスのbrome mosaic virus(BMV)とcowpea chlorotic mottle virus(CCMV)を用いて、ウイルスの宿主特異性について研究している。本研究の目的は、外被蛋白質遺伝子および宿主特異性に重要な役割を果たしている3a移行蛋白質遺伝子が、ウイルスの細胞間移行において果たしている役割を分子細胞生物学的手法によって詳細に調べることである。本研究では、CCMV/ササゲの系を用い、接種葉における各種変異体ウイルスの移行を細胞レベルで解析した。In situ hybridization法を用いて突然変異体ウイルスの接種葉における移行を解析した結果、3aタンパク質遺伝子変異体が一細胞に局在することが示されたことから、3a遺伝子がウイルスの細胞間移行に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。また、3a遺伝子をBMVの3a遺伝子で置換されたCCMVは、数細胞移行した後に移行を停止したことから、このようなキメラウイルスの移行は宿主植物の何らかの反応によって阻止されていることが示唆された。外被蛋白質遺伝子の欠損変異体について、その移行が接種葉内部のどの組織で停止しているかを解析するため、マーカー遺伝子を用いた変異体ウイルスの解析系の確立を試みた。外被蛋白質遺伝子やポリメラ-セ遺伝子の部分領域等をGFP遺伝子で置換した変異ウイルスあるいはGFP遺伝子とBMV, CCMVのサブゲノムプロモーターの遺伝子カセットをCCMV RNA3の種々の領域に挿入した変異ウイルスを作製した。これらの変異体RNAをササゲ葉に接種後、経時的に葉に紫外線を照射し、GFPの検出を試みた結果、いずれの接種区においても変異体ウイルスの存在を示す緑色の蛍光は、観察されなかった。今後はさらに、GFP遺伝子をウイルス遺伝子と融合した変異体ウイルスについても検討していく予定である。
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