研究課題/領域番号 |
06660170
|
研究種目 |
一般研究(C)
|
研究機関 | 国立予防衛生研究所 |
研究代表者 |
田中 康仁 国立予防衛生研究所, 細胞化学部, 主任研究官 (30113484)
|
研究分担者 |
天野 富美夫 国立予防衛生研究所, 細胞化学部, 主任研究官 (90142132)
|
キーワード | マクロファージ / 脂肪酸 / アラキドン酸 / エイコサペンタエン酸 / プロスタグランジン / プロスタグランジンエンドパンオキサイド合成酵素 / リポ多糖 / ガンマーリノレン酸 |
研究概要 |
1.マクロファージ系細胞株RAW264.7を用いて脂肪酸とBSAの複合体による細胞修飾法、GCとGC-MSによる脂肪酸定量法を確立した。ω3脂肪酸のEPAまたはαリノレン酸(αLA)修飾細胞では用いた脂肪酸とその代謝産物のDPAまたはEPAの増加が検出された。他方、ω6脂肪酸であるγリノレン酸(γLA)修飾細胞ではγLAの増加はわずかで、ジホモγリノレン酸やアラキドン酸(AA)の増加が認められた。AA修飾ではAAのみが増加した。2.プロスタグランジン(PG)H合成酵素(PGHS)活性測定法を確立し各種脂肪酸の効果を調べた。飽和脂肪酸及びオレイン酸は酵素活性に影響を与えなかったが、AA及びEPAはこの酵素活性を強く阻害した。この阻害は基質[^<14>C]AAに対する拮抗阻害として説明できる。一方、酵素反応の基質とはならないリノール酸、αLAあるいはγLAも高濃度ではPGHS活性を阻害した。3.EPAを基質とするPGHS活性を測定したところ、AAに比べ1/5程度しか反応しなかった。4.脂肪酸修飾した細胞のPGHS比活性について調べたところ、脂肪酸修飾のみではPGHS比活性はほとんど変化していなかった。5.この細胞ではLPS刺激によりPGHS比活性の上昇とPG遊離促進が観察される。ウエスタンブロット法により誘導型のPGHS-2がLPS刺激により増加していることが確認され、この酵素の誘導がPG遊離の調節に重要であることが示唆された。6.EPA修飾細胞ではLPS刺激によるPGHS比活性の上昇は認められず、また、AA修飾細胞をLPS刺激すると、PGHS比活性は著しく低下した。しかしながら、ウエスタンブロット法の結果はPGHS-2の誘導が未修飾細胞と同様かそれ以上であることを示唆しており、マクロファージのPG遊離に新たな因子の関与も考えられる。この点について更に解析を進めたい。
|